欧洲山杨液泡膜Na＋／H＋反向运输体性质鉴定.doc

欧洲山杨液泡膜Na^+/H^+反向运输体的性质鉴定欧洲山杨液泡膜Na^,,H^,反向运输体的性质鉴定—翻—————固圈PII~I!器…,)ln).+/H+反向运输体的性质鉴定术刘晶晶'张旭家D"卢存福)''()中国科学院生物物理研究所,生物大分子国家重点实验室,北京100101北京林业大学生物科学与技术学院,北京100083摘要植物液泡膜Na+/I-I反向运输体可将细胞质中的Na转运到液泡内储存,,捣碎破碎愈伤组织细胞,,该液泡能够利用此梯度调控Na+的转运,表明液泡膜上存在Na+/I-I反向运输体活性().Na+/I-I反向运输体的抑制剂——+/I-I反向运输体也可以转运,但亲和能力比Na+低30%.该结果首次证明木本植物的液泡膜上存在Na+/I-I+,愈伤组织在盐胁迫条件下,Na+/I-I反向运输体活性明显下降,,Na+/I-I反向运输体,,,植物必需保持细胞质内较低的Na浓度,+的吸收,同时还要将吸收的Na十外排或使Na区隔化到液泡内t".通常情况下,植物细胞通过在细胞质膜和/或液泡膜Na?反向运输体(antiporter)+/H+反向运输体fNha),导致Na在液泡内聚集,进而调节细胞内的pH值,细胞体积以及胞内Na十的浓度,对植物耐盐性起重要作用【,将液泡膜NH十反向转运蛋白基因AtNHX1转化拟南芥[31,油菜【4】,番茄【习,该基因超表达,,在高盐环境下总是尽力保持胞质内较低的Na浓度,这就需要有质膜和液泡膜上的Na+/H反向运输体fNha)来调节,所以该蛋白质的功能,+/H反向运输体(Nha)首先是在大麦质膜发现的[6】,在众多盐生植物如盐角草【7J,大洋洲滨藜[81,车前属[91,冰日午时花[1o】也发现了类似的Nha,,从耐盐木本植物——胡杨中克隆出它的Nha基因(PeNhaD1)?】,)的愈伤组织为材料,首次发现木本植物愈伤组织液泡膜上存在Nha(PtNha),该运输体的活性随培养基盐浓度升高而降低,,,附加1mg/L二氯苯氧乙酸(2,4一D),,30g/,+国家自然科学基金重点项目(30430430).":010—64888517,E—mail::010—62338346,E—mail:收稿日期:,接受日期:-【2】提取胡杨悬浮细胞液泡微囊的方法,将愈伤组织置于预冷的组织捣碎机(Blender),按1:2(组织鲜重/g:缓冲介质体积/m1)加入缓冲介质(30mmol/LMES—,250mmol/L蔗糖,5mmol/LEDTA,10%甘油,500儿B一巯基乙醇,200mmol/LDTT,,%BSA,1gPVP/1O0g组织细胞),()离1~,25min,以弃去管底线粒体,(Beckman45Ti)离心45min,弃去上清,沉淀中加入重悬液(10mmol/LMES—Tris,,250mmol/L蔗糖,5%甘油,lmmol/LEDTA,lmmol/LDTT,)