荧光光度法测定样品中核黄素的含量课件.ppt

荧光光度法测定样品中核黄素的含量基础化学实验Ⅳ(仪器分析实验)日立F-4500荧光分光光度计的使用(第一次训练)荧光激发光谱和发射光谱的制作(第一次训练)工作曲线法(巩固训练)实验技能训练要点一、实验目的二、实验原理三、实验步骤四、结果处理五、思考题六、实验延伸一、实验目的学习荧光分光光度法测定样品中维生素B2的分析原理。掌握日立F-4500荧光分光光度计的使用方法,并了解此仪器的主要构造。了解分子荧光产生的机理。常温下,处于基态的分子吸收一定的紫外可见光的辐射能成为激发态分子,激发态分子通过无辐射跃迁至第一激发态的最低振动能级,再以辐射跃迁的形式回到基态,发出比吸收光波长长的光而产生荧光。二、实验原理激发光谱:固定测量波长(选最大发射波长),化合物发射的荧光强度与照射光波长的关系曲线。激发光谱曲线的最高处,处于激发态的分子最多,荧光强度最大。发射光谱:固定激发光波长(选最大激发波长),化合物发射的荧光强度与发射光波长关系曲线荧光光谱激发光谱发射光谱固定发射光波长进行激发光波长扫描,找出最大激发光波长,然后固定激发光波长进行荧光发射波长扫描,找出最大荧光发射波长。激发光波长和发射荧光波长的选择是本实验的关键。荧光分析法在稀溶液中,荧光强度IF与物质的浓度c有以下的关系:当实验条件一定时,荧光强度与荧光物质的浓度成线性关系:这是荧光光谱法定量分析的理论依据。IF----荧光强度F-----荧光量子产率b--吸收光程--摩尔吸光系数C---可见分光度法比较,荧光分析法具有更高的灵敏度。。荧光法既能依据发射光谱,又能依据吸收光谱来鉴定物质。、操作方法简便。荧光分析法的特点荧光分析仪器常用的荧光分析仪器由激发光源、单色器、液槽、检测器和显示记录器五部分构成,如下图所示: