荧光光度法测定样品中核黄素的含量课件.ppt

荧光光度法测定样品中核黄素的含量
基础化学实验Ⅳ(仪器分析实验)
化学国家级实验教学示范中心
Northwest University
日立F-4500荧光分光光度计的使用(第一次训练)
荧光激发光谱和发射光谱的制作(第一次训练)
工作曲线法(巩固训练)
实验技能训练要点
一、实验目的
二、实验原理
三、实验步骤
四、结果处理
五、思考题
六、实验延伸
一、实验目的
学习荧光分光光度法测定样品中维生素B2的分析原理。
掌握日立F-4500荧光分光光度计的使用方法,并了解此仪器的主要构造。
了解分子荧光产生的机理。
常温下,处于基态的分子吸收一定的紫外可见光的辐射能成为激发态分子,激发态分子通过无辐射跃迁至第一激发态的最低振动能级,再以辐射跃迁的形式回到基态,发出比吸收光波长长的光而产生荧光。
二、实验原理
激发光谱:固定测量波长(选最大发射波长),化合物发射的荧光强度与照射光波长的关系曲线。激发光谱曲线的最高处,处于激发态的分子最多,荧光强度最大。
发射光谱:固定激发光波长(选最大激发波长), 化合物发射的荧光强度与发射光波长关系曲线
荧光光谱
激发光谱
发射光谱
固定发射光波长进行激发光波长扫描,找出最大激发光波长,然后固定激发光波长进行荧光发射波长扫描,找出最大荧光发射波长。激发光波长和发射荧光波长的选择是本实验的关键。
荧光分析法
在稀溶液中,荧光强度IF与物质的浓度c有以下的关系:

当实验条件一定时,荧光强度与荧光物质的浓度成线性关系:

这是荧光光谱法定量分析的理论依据。
IF----荧光强度
F-----荧光量子产率
b--吸收光程
--摩尔吸光系数
C--荧光物质浓度
a. 与紫外-可见分光度法比较,荧光分析法具有更高的灵敏度。
b. 选择性好。荧光法既能依据发射光谱,又能依据吸收光谱来鉴定物质。
c. 所需试样量少、操作方法简便。
荧光分析法的特点
荧光分析仪器
常用的荧光分析仪器由激发光源、单色器、液槽、检测器和显示记录器五部分构成,如下图所示: