荧光光度法测定核黄素的含量一、实验目的了解荧光法测定核黄素的原理和方法光谱分析法有哪些?学习荧光分光光度计的操作和使用二、实验原理核黄素(维生素B2),一种异咯嗪衍生物VB2在中性或弱碱性的水溶液中为黄色,并具有很强的荧光,但在强酸和强碱中易被破坏二、实验原理核黄素的激发光波长范围为440-500nm,发射光波长范围为510-550nm在稀溶液中,核黄素荧光强度与其浓度成正比样品中加入亚硫酸盐,将荧光素还原成无荧光物质,然后测定样品中残余荧光强度,两者之差即为核黄素所产生的荧光三、、、天平试管、容量瓶、烧杯、研钵、滤纸、漏斗四、试剂的配制核黄素标准液(5μg/mL)准确称取核黄素10mg,,置于水浴中直至完全溶解。冷却至室温,用蒸馏水定容至2000mL,转入棕色瓶中。五、:取核黄素药片一粒,放入研钵中磨成粉;定容:用蒸馏水洗入容量瓶,定容至100mL,摇匀,浸提10min;过滤:收集部分滤液于试管中;稀释:取滤液2mL于棕色容量瓶中,,用蒸馏水定容100mL,待测。五、,按下表顺序操作:五、操作步骤注意:在测定中,如果待测样品溶液的荧光强度超出100%,则需要再行稀释,并记录稀释倍数;或者通过调节里灵敏度,最后乘以倍率亚硫酸钠不能过多,以免影响荧光强度;加入后立即读数,否则核黄素又被氧化成荧光型
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