罗氏实时荧光定量PCR仪.ppt

实时荧光定量P的
仪
、实时荧光定量PCR的原理
荧光定量PCR
通过荧光染料或荧光标记的特异性的探针,对PCR产物进行
标记跟踪,实时在线监控反应过程,结合相应的软件可以对
结果进行分析,计算待测样品的初始模板量。
荧光定量PCR仪
荧光定量PCR仪是一种带有激发光源和荧光信号检测系统的
PCR仪,通常配有电脑系统及相应的分析软件。
定量PCR技术的产生
1992年由 Higuchi等人第一次报告:使用EB内插染
料法插至双链DNA,经改装的带有冷CCD的PCR
仪检测样晶的荧光强度
PCR循环≡双链DNA=染料=荧光
后来用与双链DNA有更强结合力的 SYBR Green I
取代EB
荧光定量实时PCR与普通PCR的比较
实时在线监控
对样晶扩增的整个过程进行实时监控,能够实时
地观察到产物的增加,直观地看到反应的对数期
降低反应的非特异性
使用引物和荧光探针同时与模板特异性结合,提
高了PCR反应的特异性
增加定量的精确性
全程监控,准确的算法进行定量
结果分析更加快捷方便,无需跑胶
罗氏产品介绍以及与
同类产品之间的对比
、LC15和LC20
LightCycler荧光定量PCR系统


Lightcycler15结构分析
以空气加热及
冷却迅速改变
带有极高表面积/
容量比例的密封
毛细管
加热线圈
可容纳32个样品的
将荧光仪定位
档器发动机
热室
将样品置于
光学仪上的
风扇
分档器发动
免维护的
LED光源
光学倍增管
Lightcycler20结构分析
空气加热系统
LED激发光源
热力学结构
特点
1、空气加热
2、毛细管反应体系
优点:
1、升降温速度快(℃-20℃/秒)
2、体系均一,不存在边缘现象
3、把反应体系缩小到0-20u,节省试剂成本
实现快速PCR
光学结构
特点
1、免维护的LED冷光源,寿命长达2万小时以上
2、光学倍增管( Rodenstock)
3、多达6通道()和3通道(LC15)实时检
优点:
、毛细管光学特性将光线散射、衍射降至最低,
避免LED功率低的问题
2、免维护,带自动检验功能
3、轻易实现内标、内对照及多重PCR