罗氏实时荧光定量pcr仪分解.ppt

实时荧光定量PCR仪
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一、实时荧光定量PCR的原理
荧光定量 PCR
通过荧光染料或荧光标记的特异性的探针，对PCR产物进行标记跟踪，实时在线监控反应过程，结合相应的软件可以对结果进行分析，计算待测样品的初始模板量。
荧光定量 PCR仪
荧光定量PCR仪是一种带有激发光源和荧光信号检测系统的PCR仪，通常配有电脑系统及相应的分析软件。
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定量PCR技术的产生
1992年由Higuchi等人第一次报告：使用EB内插染料法插至双链DNA，经改装的带有冷CCD的PCR仪检测样品的荧光强度
PCR循环 = 双链DNA = 染料 = 荧光
后来用与双链DNA有更强结合力的SYBR Green I取代EB
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荧光定量实时PCR与普通PCR的比较
实时在线监控
对样品扩增的整个过程进行实时监控，能够实时地观察到产物的增加，直观地看到反应的对数期
降低反应的非特异性
使用引物和荧光探针同时与模板特异性结合，提高了PCR反应的特异性
增加定量的精确性
全程监控，准确的算法进行定量
结果分析更加快捷方便，无需跑胶
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4
罗氏产品介绍以及与同类产品之间的对比
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一、
LightCycler荧光定量PCR系统


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Lightcycler 结构分析
以空气加热及冷却迅速改变温度
带有极高表面积/容量比例的密封20l毛细管
加热线圈
可容纳32个样品的卡盘
将荧光仪定位的
分档器发动机
将样品置于
光学仪上的
分档器发动机
热室
风扇
滤器
免维护的
LED光源
光学倍增管
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Lightcycler 结构分析
空气加热系统
LED激发光源
PMT检测系统
光纤
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热力学结构
特点：
1、空气加热
2、毛细管反应体系
优点:
1、升降温速度快（ ℃ -20℃/秒），
2、体系均一，不存在边缘现象
3、把反应体系缩小到0-20ul，节省试剂成本
实现快速PCR
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光学结构
特点：
1、免维护的LED冷光源，寿命长达2万小时以上
2、光学倍增管（Rodenstock ）
3、多达6通道（）和3通道（）实时检
测
优点：
1、毛细管光学特性将光线散射、衍射降至最低，
避免LED 功率低的问题
2、免维护，带自动检验功能
3、轻易实现内标、内对照及多重PCR
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