高效液相色谱法(1).ppt

第四章 高效液相色谱法
High Performance Liquid Chromatography
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本章要求
⒈ 了解高效液相色谱法的优缺点
⒉ 了解高效液相色谱仪的结构
⒊ 掌握常用检测器的原理及应用范围
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定义：以液体作为流动相的色谱法称为液相色谱法
高效液相色谱法（HPLC）：20世纪60年代末70年代
技术：高压泵、高效固定相和高灵敏度检测器
特点：速度快、效率高、灵敏度高、操作自动化
一、 概述
高效液相色谱法简介
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1．高效液相色谱法与经典液相色谱法比较

⑴ 高速：HPLC分离效率高，速度快，一次几分钟和几十分钟就可完成。色谱柱的寿命长，可达两年以上。
⑵ 高效：HPLC高压(2~6 MPa)下操作，填料颗粒小(2~50 m)，规则均匀的固定相，传质阻力小，柱效高(N=4000~60000 块/m)，分离效率高。
⑶ 高灵敏度：现代高效液相色谱仪普遍配有高灵敏度检测器，使分析灵敏度比经典色谱有大提高（紫外检测器最小检测限可达10-9 g；荧光检测器最小检测限可达10-11~10-13 g。
⑷ 高自动化：HPLC进样量小(X~X0 L)。带有自动进样装置和工作站。
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2．高效液相色谱法与气相色谱法的比较
⑴ 适用范围
GC适用于沸点低、热稳定性好、中小分子量的化合物，HPLC不受此种限制。气相色谱一般都在较高温度下进行，而高效液相色谱法则经常可在室温条件下工作。
⑵ 流动相
GC流动相仅运载样品，不起分离作用，但无毒，易于处理。而HPLC流动相除了运载样品外，还有分离作用，可改变流动相组成，进行有效的分离。但流动相一般有毒，费用高。
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⑶ 色谱柱
GC柱很长，特别是毛细管柱可长至几十米至上百米，柱效很高(理论塔板数N=104~106)。HPLC柱较短，一般为15~25 cm，柱效(理论塔板数N=103~104)，低于GC柱。
⑷ 检测器
与GC相比，HPLC检测器种类较多。
⑸ 制备色谱
GC难以制备样品，因为进样量小，难以收集或被破坏。HPLC可进行制备，即制备色谱。
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一﹑高效液相色谱仪的结构
高效液相色谱仪
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一般分为4个主要部分：高压输液系统、进样系统、分离系统和检测系统。此外还配有辅助装置：如梯度洗脱、自动进样及数据处理等。
工作过程如下：
首先高压泵将贮液器中流动相溶剂经过进样器送入
色谱柱，然后从控制器的出口流出。当注入欲分离的样
品时，流经进样器贮液器的流动相将样品同时带入色谱
柱进行分离，然后依先后顺序进入检测器，记录仪将检
测器送出的信号记录下来，由此得到液相色谱图。
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数据分析系统
输液系统
进样系统
分离系统
检测系统
HPLC的系统组成
数据处理系统
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