人外周血单个核细胞体外向肝样细胞诱导分化研究.pdf

人外周血单个核细胞体外向肝计:学位论文:页格:插幅王凯指导教师:赵钢教授申请学位级别:硕士学位论文提交日期:月学位授予单位:大连医科大学表图:
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世年』月上日独创性声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知,除了文中特别加以标注和致谢的地方外,论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果,也不包含为获得大连医科大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明学位论文作者签名:签字日期:确的说明并表示谢意。
目录一、摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯英文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯二、正文⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯前言⋯⋯⋯⋯材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯结论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯三、文献综述⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯综述⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯四、致谢⋯⋯⋯
硕士研究生:人外周血单核细胞体外向肝样细胞诱导分化的研究指导教师:赵钢教授指导,⒆椋何晶教授专业名称:内科学摘要治疗终末期肝病所致的肝功能衰竭是临床治疗的一大难题,目前除了改善临床症状外没有较为有效的治疗手段,尤其是无法再生损伤、死亡的肝脏细胞,这使得肝移植可能成为目前一种可恢复肝脏功能的治疗方法,然而因其供体短缺、免疫排斥、治疗费用较高等原因,临床应用难以推广。现在随着细胞生物技术和分子生物学技术的发展,以及对干细胞研究的深入,通过干细胞移植治疗慢性肝病越来越受到国内外专家的重视。干细胞是一类具有无限自我增殖更新能力的多潜能细胞,在特定的条件下具有定向诱导分化的潜能,如在特定的条件下,干细胞能够向内胚层的肝脏细胞分化。因此,干细胞再生技术为肝病的治疗提供了一种新韵研究方向。.一目的:本课题组已在前期研究工作中证明大鼠周围血干细胞在一定条件下可以诱导分化为肝样细胞。此次本实验研究经瓹动员后肝硬化患者外周血单个核细胞蠧细胞的含量,以及贖、诱导因子的作用下能否向肝脏样细胞转分化,证实外周血干细胞的可塑性,进一步为临床上探索外周血干细胞移植治疗肝病提供理论依据。方法:醚O赴掷牖杉璆动员后肝硬化患者的外周血单个核细胞,并通过流式细胞仪检测的含量。芏忍荻壤胄姆ǚ掷氪炕ジ龊讼赴S肦嘌号嘌庵苎5ジ‘核细胞,并洗涤未贴壁细胞,进一步出去杂细胞,使之纯化。‘.煤ヌヅQG濉.、巯基乙醇的培养液培养贴壁细胞欤天换天后半量换液,液对贴壁细胞诱导,每谂嘌讨泄细胞标志物一,,.‘、
杂谟盏己天、。煜赴鹷。优检测肝细胞特异性表达:O赴掷牖掷氤龅耐庵苎V械ジ龊讼赴雊,:掷氤龅南赴试残危ㄅ卫既旧ḿ觳庀赴盥%,培养∈焙螅养液洗涤去除未贴壁细胞,贴壁细胞呈现小圆形,大小均匀,透明度大。,细胞趋向融合。在未给予增殖因子的对照组中,细胞大部分呈现梭形伸展,单个生长。璈、盏天后,可见细胞一部分呈现多边形,体积变大;诱导天后,细胞总体数量减少,多边形细胞比例增多。未加诱导因子的对照组,细胞呈梭形生长,大部分细胞贴壁伸展。杂盏己蟮斓南赴妹庖哂ü夥ḿ觳釧、谋泶铮ü显微镜下显示结果均为阳性。对照组以及加入诱导因子前虲谋泶镂阴性。盏天、天的细胞经检测到肝细胞特异性表达。结论:外周血单个核细胞在一定的条件下具有向肝脏样细胞分化的潜能,并可能代替骨髓间充质干细胞移植治疗肝病。焙蟾斡不颊咄庵苎5ジ龊讼赴逋庠谝欢ㄓ盏寂嘌跫驴勺7化为肝样细胞。7只母窝赴捎蠥、的表达,其中,表达强度与培养时间成正比,而煞幢取唇杏盏寂嘌牡ジ龊讼赴苌僮7只8窝赴庵苎5ジ龊讼赴7只S懈蜗赴δ艿耐保邢赴翁Ц谋洌似于肝细胞。关键词:外周血单个核细胞肝细胞细胞分化
广—————————————————————————————————————————————————————一一一襰甌,篧篒甌:‘‘甒趓弘甋:’骸琣,狢’:.一’·.·‘·:;:’甌,.籦.‘一甀産.,一·瓹.—·●●..:、‘。‘●,’‘.。●‘’’‘。,‘’。。、··
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