猪瘟病毒感染宿主外周血单个核细胞转录谱研究.pdf

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导獬:、%芎ǘ嘣乱比Ⅷ㈣㈣洲洲洲⋯删㈣跏只兆广西大学学位论文原创性声明和学位论文使用授权说明学位论文原创性声明学位论文使用授权说明本人声明:所呈交的学位论文是在导师指导下完成的,研究工作所取得的成果和相关知识产权属广西大学所有。除己注明部分外,论文中不包含其他人已经发表过的研究成果,也不包含本人为获得其它学位而使用过的内容。对本文的研究工作提供过重要帮助的个人和集体,均已在论文中明确说明并致谢。论文作者签名:本人完全了解广西大学关于收集、保存、使用学位论文的规定,即:本人保证不以其它单位为第一署名单位发表或使用本论文的研究内容;按照学校要求提交学位论文的印刷本和电子版本;学校有权保存学位论文的印刷本和电子版,并提供目录检索与阅览服务;学校可以采用影印、缩印、数字化或其它复制手段保存论文;学校可以公布论文的部分或全部内容。请选择发布时间:口即时发布口解密后发布C苈畚男枳⒚鳎⒃诮饷芎笞袷卮斯娑
猪瘟病毒感染宿主外周血单个核细胞转录谱的研究摘要,只含有一个开放阅读框,编码一个由个氨基酸组成的多聚蛋白,该蛋白在病毒蛋白酶和宿主细胞酶的作用下,分解成为鼋峁沟鞍缀个非结构蛋白。猪是的惟一宿主,引起的猪瘟是一种高度接触性传染病,具有很高的发病率和死亡率,给养猪业造成巨大的经济损失,世界动物组织将其列为啻静≈弧随着猪瘟疫苗的广泛使用,猪瘟由大流行转变为地方性流行或散发,临床症状从典型转变为非典型,出现母猪繁殖障碍和新生仔猪先天性感染。在疫苗免疫的压力下,逃避宿主免疫系统的识别并建立持续性感染等致病机制目前尚不清楚,对与宿主相互作用的研究将为阐明这些机制提供线索。猪瘟的病程发展分为潜伏期、前驱期、明显期和转归期四个阶段,外周血单个核细胞,魑K拗免疫系统的重要组成部分同时又是感染的靶细胞,其基因表达的变化对于猪瘟病程的四个发展阶段极为重要,基因在这四个发展阶段的动态和整体的转录研究将有助于阐明与宿主的相互作用机制。基因芯片可以同时对上万个基因的转录进行研究,获得的病毒诱导宿主细胞基因转录改变的大量信息对研究病毒与宿主的相互作用具有重要的意义。本研究应用猪基因组芯片对感染潜伏期、前驱期、明显期和猪瘟病毒珻是一种有囊膜的单股正链《荆蜃榇笮≡
觯痬..转归期四个不同感染阶段的基因转录进行检测,对转录差异基因的生物学功能分析将增进我们对与宿主相互作用机制的了解。方】抵砻客贩直鸺∪庾⑸的强毒石门株。实验猪攻毒后,出现高热稽留、全身广泛性小点出血、后肢麻痹等典型的猪瘟临床症状,分碓诟腥竞蟮焖劳觯头在感染后第天死亡。在病毒感染前实验猪的淋巴细胞和单核细胞数量分别为土:/和觯痬诟腥竞蟮天淋巴细胞和单核细胞数量分觯痬T贑腥竞蟮齑友R杭觳獾紺怂岷偷鞍祝贑腥竞蟮天从中检测到核酸和蛋白,并且的核酸拷贝数和病毒滴度随着病程的延长而增多。纷⑸淞姿嵫位撼逡旱囊跣远哉罩碓谑匝槠诩渚闯鱿秩何猪瘟临床症状,淋巴细胞和单核细胞数量正常,从血液和中也未检测到核酸和蛋白。在感染前第旌透腥竞蟮,,旆掷胫淼腜樘嶙醋B己吞逋庾B嫉玫降腸牖蛐酒咏唬秆∽B挤⑸改变的基因。芯片分析显示在病毒感染的整个阶段,稢腥局砻头分别有、和个基因的转录发生改变。在分碇卸汲鱿转录改变的基因有觯辉头猪中都出现转录改变的基因有觥利用基因芯片显著性分析软件对犯腥局淼幕蛐酒萁凶酆贤臣分析,发现有龌占基因芯片上基因总数的的转录在感染后发生兑陨系南灾谋洹个转录发生改变的基因中,分别有个基因的转录发生上调和下调。在感染后第,天的基别减少至
因转录上调的数量分别是、和觯换蜃B枷碌鞯氖分别是、和觥;虻纳镅Чδ芊治鱿允荆个基因的生物学功能未知;⑾赴蛲%,/、⒆⑿鲁麓ィ⒆T%,/、发育为了检测病原微生物对透扇潘夭揪兜挠跋欤狙芯客苯⒘检测猪细胞因子產...和甁基因转录的荧光定量方法,该方法标准曲线的相关系数在之间,具有良好的线性关系;熔解曲线为特异性单峰,最小检测浓度在/¨=ù朔椒ㄓ糜谘橹せ蛐酒荩觳饨峁胄酒际醴治数据基本一致,证实了基因芯片数据的可靠性。本研究获得的转录谱反映了在猪瘟潜伏期、前驱期、明显期和转归期四个阶段对宿主的影响,这些数据有助于我们从宿主的角度探讨致病的分子机制,为转录差异基因的深入研究打下良好的基础。关键词:%,/。
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