2020年奶粉菌落总数测定.ppt

Contents
实验目的
实验器材
培养基、试剂和样品
实验进度表
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实验步骤
奶粉菌落总数测定
2021/1/12
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实验目的
掌握食品中菌落总数测定的基本程序和要点。
学会对不同样品稀释度确定的原则。
奶粉菌落总数测定
2021/1/12
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实验器材
电子天平（）、量筒500ml、振荡器、恒温培养箱（36 ℃±1 ℃ ）、 恒温水浴箱（46 ℃±1 ℃）、无菌吸管：2支10 mL（ mL 刻度）、无菌锥形瓶：容量500 mL、 无菌培养皿：6只直径90 mm、pH 计或pH 比色管或精密pH 试纸、稀释试管：6支18mm×180mm、放大镜
奶粉菌落总数测定
2021/1/12
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培养基、试剂和样品
平板计数琼脂（plate count agar，PCA）培养基
成分
胰蛋白胨 g
酵母浸膏 g
葡萄糖 g
琼 脂 g
蒸馏水 1000 mL
pH ±
制法
将上述成分加于蒸馏水中，煮沸溶解，调节pH。分装试管或锥形瓶，121 ℃高压灭菌15 min
奶粉菌落总数测定
2021/1/12
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培养基、试剂和样品
磷酸盐缓冲液
成分
磷酸二氢钾（KH2PO4） g
蒸馏水 500 mL
pH
制法
贮存液： g的磷酸二氢钾溶于500 mL蒸馏水中，用大约175 mL的1 mol/L氢氧化钠溶液调节
pH，用蒸馏水稀释至1 000 mL后贮存于冰箱。
稀释液： mL，用蒸馏水稀释至1 000 mL，分装于适宜容器中，121 ℃高压灭菌15 min
奶粉菌落总数测定
2021/1/12
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培养基、试剂和样品
无菌生理盐水
成分
氯化钠 g
蒸馏水 1 000 mL
制法
000 mL蒸馏水中，121 ℃高压灭菌15 min。
奶粉菌落总数测定
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试验进度表
奶粉菌落总数测定
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实验步骤
1. 样品的稀释
固体和半固体样品：称取25 g 样品置盛有225 mL 磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌均质杯内，8000 r/min～10000 r/min 均质1 min～2 min，或放入盛有225 mL 稀释液的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打1 min～2 min，制成1:10 的样品匀液。
液体样品：以无菌吸管吸取25 mL 样品置盛有225 mL 磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌锥形瓶（瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠）中，充分混匀，制成1:10 的样品匀液。
用1 mL 无菌吸管或微量移液器吸取1:10 样品匀液1 mL，沿管壁缓慢注于盛有9 mL 稀释液的无菌试管中（注意吸管或吸头尖端不要触及稀释液面），振摇试管或换用1 支无菌吸管反复吹打使其混合均匀，制成1:100 的样品匀液。
按上面程序，制备10 倍系列稀释样品匀液。每递增稀释一次，换用1 次1 mL 无菌吸管
或吸头。 。
奶粉菌落总数测定
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实验步骤

根据对样品污染状况的估计，选择2 个～3 个适宜稀释度的样品匀液（液体样品可包括原液），在进行10 倍递增稀释时，吸取1 mL 样品匀液于无菌平皿内，每个稀释度做两个平皿。同时，分别吸取1 mL 空白稀释液加入两个无菌平皿内作空白对照。(适宜稀释度为10-2,10-3)
及时将15 mL～20 mL 冷却至46 ℃的平板计数琼脂培养基（可放置于46 ℃±1 ℃恒温水浴箱中保温）倾注平皿，并转动平皿使其混合均匀。
待琼脂凝固后，将平板翻转，36 ℃±1 ℃培养48 h±2 h。水产品30 ℃±1 ℃培养72 h±3 h。
如果样品中可能含有在琼脂培养基表面弥漫生长的菌落时，可在凝固后的琼脂表面覆盖一薄层琼脂培养基（约4 mL），凝固后翻转平板， 条件进行培养。
奶粉菌落总数测定
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实验步骤
3．菌落计数
可用肉眼观察，必要时用放大镜或菌落计数器，记录稀释倍数和相应的菌落数量。菌落计数以菌落形成单位（colony-forming units，CFU）表示。
选取菌落数在30 CFU～300 CFU 之间、无蔓延菌落生长的平