(14)骆丹-电子版-copy-2011-4-24.ppt

南京医科大学第一附属医院皮肤科南京医科大学第一附属医院皮肤科骆骆丹丹闵玮闵玮高英英高英英周炳荣周炳荣- 端粒在皮肤光老化中的作用- -改善皮肤光老化的临床与基础改善皮肤光老化的临床与基础 1. ??光老化光老化:在内源性老化的基础上加之环境因素(主要为紫外线辐射)的损害而发生的外源性老化,临床上表现为提前出现更加严重的老化表现。 PH端粒与光老化端粒与光老化空白组 1 UVA 组8-MOP+UVA 组空白组 UVA 8-MOP+UVA 8-MOP+UVA 照光三个月照光三个月的小鼠皮肤的小鼠皮肤光老化皮肤的动物模型观察光损伤作用光老化皮肤的动物模型观察光损伤作用照光照光 7d 7d后各组细胞超微结构后各组细胞超微结构 8-MOP+UVA 组细胞出现了明显的细胞衰老改变:胞浆中可见较多空泡,细胞核中可见较多絮状物,核仁不清晰,局部出现核膜内褶,核内染色质凝集且分布不均。线粒体肿胀、粗面内质网扩张,脱颗粒,可见较多次级溶酶体。 8000 8000 × × 8-MOP+UVA 8-MOP+UVA 组组15000 15000 × × 8000 8000 × × UVA UVA 组组15000 15000 × × 8000 8000 × × 8-MOP 8-MOP 组组15000 15000 × × 8000 8000 × ×对照组对照组 15000 15000 × ×??端粒结构特点端粒结构特点-- --光损伤易感性: 光损伤易感性: 光老化中紫外线引起的基因的氧化应激损伤,大部分情况下发生在鸟嘌呤残基;端粒的重复序列 TTAGGG 二分之一是鸟嘌呤残基且 3’末端也富含鸟嘌呤。-TTAGGG- -TTAGGG- 结构结构 2. ?? NB-UVB NB-UVB 和和 PUVA PUVA : : 临床上光疗法(治银屑病、白癜风) 的主要副作用之一是皮肤易出现光老化外观??光老化模型: 光老化模型: 已联合利用 8-MOP+ UVA 建立小鼠皮肤光老化模型, 在此基础上利用人皮肤成纤维细胞经相同处理建立体外光老化模型??内源性老化中的端粒缩短机制内源性老化中的端粒缩短机制?? 1. ? ??2 ? 研究内容研究内容————实验流程实验流程对照组对照组 8-MOP 8-MOP 组组 or or 8-MOP+UVA 8-MOP+UVA UVA UVA 组组 MTT 法检测细胞活性绘制细胞生长抑制曲线流式细胞术检测细胞周期分布透射电镜观察细胞超微结构细胞化学酶法检测β-半乳糖苷酶处理后 24h , 48h, 72h, 7d 分光光度法检测细胞内氧化应激损伤水平: MDA, SOD 及 T-AOC 免疫荧光检测细胞内氧化光产物 8-oxo-dG Real-Time PCR 检测端粒的相对长度: T/S Western Blot 检测细胞老化相关蛋白 P53, P21 WAF-1 及 P16 INK-4a 药物组药物组 1. 8-MOP 组 UVA 组 8-MOP+UVA 组照光后 24h 、48h 、72h 及7d后 8-MOP+UVA 联合处理组 SA- β-Gal 阳性细胞比例较对照组均明显增高( *P< ), 且随时间积累而逐渐增高( r=) 。结论: 8-MOP+UVA 联合作用可使皮肤 FB 出现光老化生物学特性改变 SA- β-Gal 电镜电镜 2. 2. 照光后照光后 2h 2h 各组细胞光产物各组细胞光产物 8-oxo-dG 8-oxo-dG 8- 8-羟基脱氧鸟嘌呤羟基脱氧鸟嘌呤对照组对照组 UVA UVA 组组*** 8-MOP+UVA 组 8-oxo-dG 阳性细胞核比例明显高于对照组(**P < ); UVA 组8- oxo-dG 阳性细胞核比例也明显高于对照组(* P< ); 而 8-MOP 处理组较对照组无明显统计学差异( P> ) 3. Real-Time PCR 3. Real-Time PCR 检测各组细胞端粒相对长度比较检测各组细胞端粒相对长度比较 8-MOP+UVA 联合处理组端粒相对长度明显短于对照组( ± vs ± , P< ) UVA 照射组( ± vs ±, ) 8-MOP+UVA 联合处理组( ± vs ± )端粒相对长度经