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华中科技大学
硕士学位论文
DHA减轻脂多糖介导的新生大鼠脑白质损伤研究
姓名:唐庆
申请学位级别:硕士
专业:儿科学
指导教师:罗小平
2010-05
华中科技大学硕士学位论文
DHA 减轻脂多糖介导的新生大鼠脑白质损伤研究
华中科技大学同济医学院附属同济医院儿科武汉 430030
导师罗小平
研究生唐庆
中文摘要

目的脑室周围白质软化(periventricular leukomalacia, PVL)是一种常见脑白质
损害,常常与脑瘫相关。在 PVL 发病机制上除缺血/再灌注损伤之外,母亲或者胎儿
感染引起细胞因子介导的脑损伤起着重要作用。有研究显示 LPS 经孕鼠给药可引起胎
脑细胞因子表达增加,如 IL-1β、TNF-α和 IL-6 等。DHA 积聚于围产期哺乳动物脑
部皮质,对神经细胞轴突的延伸和新突起的形成和突触功能有重要作用。本课题旨在
研究 DHA 对 LPS 介导 Sprague-Dawley 大鼠脑白质损伤的效应。
方法实验动物 Sprague-Dawley 大鼠分为 LPS 组、对照组和 DHA 干预组。LPS
组大鼠于孕 17d 和 18d(足月 )连续两天给予 LPS(350µg/kg)悬液腹腔注射,
构建宫内感染大鼠模型;对照组同时间予同剂量无菌盐水注射(NS 组);DHA 干预
组大鼠于孕期给予每日一粒鱼油(DHA 130mg)灌胃,于孕 17d 和 18d 予同剂量 LPS
腹腔注射。取孕 20、21d 和生后 1、3、7、14d(P1、P3、P7、P14)胎鼠和新生鼠脑
标本用 Real-time PCR 方法检测细胞因子(TNF-α和 IL-6)在 mRNA 水平的表达情况,
同时通过免疫组化方法检测髓鞘基质蛋白(myelin basic protein, MBP)及胶质纤维酸
性蛋白(glial fibrillary acidic protein, GFAP)蛋白表达情况来评价胎鼠及新生鼠脑损伤
情况。
结果实验中各组孕鼠经腹腔注射后活动、进食均正常。LPS 组孕鼠有 1 例术后
流产,1 例死产。DHA 干预组无 1 例流产。LPS 组新生鼠出生时间较 NS 组提前 12
小时。LPS 处理的动物生后第一天与对照组相比在吸吮及肢体活动上没有明显的区别。
LPS 组新生鼠平均出生体重较 DHA 干预组组明显减低(p<)。孕鼠胎盘组织 HE
染色可见 LPS 组间质明显增生,毛细血管腔变窄,并可见炎性浸润。而 DHA 干预组
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炎性浸润减轻,血供较 LPS 组丰富。对照组 P7 新生鼠脑室周围 MBP 表达,且 LPS
组较 NS 组阳性染色细胞明显减少、染色浅(±* vs ±,p<)。MBP
在 14d 新生鼠海马表达明显,且 LPS 组较 NS 组表达减弱(±*vs ±,
p<); 但 GFAP 在 7d 新生鼠海马和白质的表达 LPS 组较 NS 组表达阳性染色细胞
明显增加、染色深(海马 ±* vs ±,p<;白质 ±* vs ±
p<)。 GFAP 在 14d 新生鼠皮质和白质中能观察到,LPS 组较 NS 组表达增强(皮
质 ±* vs ±,p<;白质 ±* vs ±,p<)。MBP 阳
性染色 DHA 组较同日龄 LPS 组增强(p<); GFAP 阳性染色 DHA 组较同日龄 LPS
组减轻(p<)。Real-time PCR 方法检测到细胞因子 TNF-α和 IL-6 整体水平 LPS
组较对照组上升,有统计学意义(p<)。DHA 组的 TNF-α和 IL-6 整体水平较 LPS
组下降,有统计学意义(p<),DHA 组的 TNF-α和 IL-6 整体水平较对照组上升,
有统计学意义(p<),但每个时间点各有差异。
结论宫内 LPS 感染可导致胎盘组织以及胎儿的炎性反应,导致新生鼠低出生体
重及以低髓鞘化和反应性星形胶质化为特征的 WMD。DHA 是鱼油的一种重要成分,
对中枢神经系统的发育成熟不可或缺,对神经元发育和功能有重要作用。DHA 能够
调节 LPS 所致新生鼠脑中促炎因子的表达,TNF-α和 IL-6 mRNA 表达下降。孕期补
充 DHA 使胎鼠和新生鼠脑中 MBP 阳性染色减少和 GFAP 阳