血清蛋白质醋酸纤.ppt

1血清蛋白质醋酸纤维素薄膜电泳 2010-10-26 汪昭旋黎小龙李刚奇赵亚军 2实验目的: ,了解电泳仪﹑电泳槽的基本结构与功能。 。 。 31 1、电泳( 、电泳( electrophoresis electrophoresis )法)法??带点粒子在直流电场中向着相反电带点粒子在直流电场中向着相反电极移动的现象称为电泳。极移动的现象称为电泳。 4 ?电泳原理:在一定 pH 条件下,不同的质点由于具有不同的等电点而带不同性质的电荷,因而在一定的电场中它们的移动方向和移动速度也不同,即它们的电泳迁移率不同,因此,可使它们分离。?影响电泳迁移率的外界因素:电场强度、溶液的 pH 值、溶液的离子强度和电渗现象?影响电泳迁移率的内在因素:质点所带净电荷的量、质点的大小和形状 5常见的电泳技术: ? ?? 2. ?? 3. ?? 4. ?? 5. 6 ?采用醋酸纤维薄膜作为支持物的电泳方法称为醋酸纤维素薄膜电泳。??醋酸纤维薄膜:将纤维素的羟基乙酰化醋酸纤维薄膜:将纤维素的羟基乙酰化为醋酸酯,溶于丙酮后制成有均一细密为醋酸酯,溶于丙酮后制成有均一细密微孔的薄膜,其厚度为微孔的薄膜,其厚度为 ~ ~ 78优点: ?? 1. ?? 2. ?? 3. ?? 4. 4. 亲水性小亲水性小 9 + 白蛋白(A) α1 α2βγ实验原理: 血清蛋白的 pI大多在 以下,在 的巴比妥缓冲液中以负离子形式存在,并且蛋白质的分子量、立体构象、等电点以及形状也有差异,在电场中迁移速度不同,可以在醋酸纤维薄膜上分离成 A、α1、α2、β和γ五条区带。 156000-300000 - γ 90000-150000 βα1:20000 α2:30000 α 69000 白蛋白分子量等电点蛋白名称 10 三、实验器材三、实验器材 1. 电泳仪: 为电泳提供直流电源。 2. 电泳槽: 为电泳提供场所。多用有机玻璃制成,电极用铂丝。 3. 血清加样器:可用盖玻片或 X胶片或微量加样器。 4. 醋酸纤维素薄膜: 2cm ×8cm 5. 其它: 培养皿(直径 9-10cm )、滤纸、玻璃板、镊子等。 DYY-5 型稳压稳流电泳仪 DYY- Ⅲ型电泳槽