血清蛋白质醋酸纤.ppt

血清蛋白质醋酸纤 维素薄膜电泳
2010-10-26
汪昭旋黎小龙李刚奇赵亚军
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实验目的:
掌握电泳的基本原理,了解电泳仪﹑电泳槽的基本结构与功能。
熟悉电泳的基本过程与定量方法。
熟悉血清电泳在临床诊断中的作用。
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1、电泳(electrophoresis)法
带点粒子在直流电场中向着相反电极移动的现象称为电泳。
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电泳原理:在一定pH条件下,不同的质点由于具有不同的等电点而带不同性质的电荷,因而在一定的电场中它们的移动方向和移动速度也不同,即它们的电泳迁移率不同,因此,可使它们分离。
影响电泳迁移率的外界因素:电场强度、溶液的pH值、溶液的离子强度和电渗现象
影响电泳迁移率的内在因素:质点所带净电荷的量、质点的大小和形状
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常见的电泳技术:





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采用醋酸纤维薄膜作为支持物的电泳方法称为醋酸纤维素薄膜电泳。
醋酸纤维薄膜:将纤维素的羟基乙酰化为醋酸酯,溶于丙酮后制成有均一细密微孔的薄膜,~
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优点:


3. 需加样量少
4. 亲水性小
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+
白蛋白(A)
α1
α2
β
γ
实验原理:,,并且蛋白质的分子量、立体构象、等电点以及形状也有差异,在电场中迁移速度不同,可以在醋酸纤维薄膜上分离成A、α1、α2、β和γ五条区带。
蛋白名称
等电点
分子量
白蛋白

69000
α

α1:20000
α2:30000
β

90000-150000
γ
-
156000-300000
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三、实验器材
1. 电泳仪:为电泳提供直流电源。
2. 电泳槽:为电泳提供场所。多用有机玻璃制成,电极用铂丝。
3. 血清加样器:可用盖玻片或X胶片或微量加样器。
4. 醋酸纤维素薄膜:2cm×8cm
5. 其它: 培养皿(直径9-10cm)、滤纸、玻璃板、镊子等。
DYY-5型稳压
稳流电泳仪
DYY-Ⅲ型
电泳槽
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