罗氏实时荧光定量PCR仪.ppt

实时荧光定量 PCR 仪一、实时荧光定量一、实时荧光定量 PCR PCR 的原理的原理荧光定量 PCR 通过荧光染料或荧光标记的特异性的探针,对 PCR 产物进行标记跟踪,实时在线监控反应过程,结合相应的软件可以对结果进行分析,计算待测样品的初始模板量。荧光定量 PCR 仪荧光定量 PCR 仪是一种带有激发光源和荧光信号检测系统的 PCR 仪,通常配有电脑系统及相应的分析软件。定量定量 PCR PCR 技术的产生技术的产生??1992 1992 年由年由 Higuchi Higuchi 等人第一次报告:使用等人第一次报告:使用 EB EB 内插染内插染料法插至双链料法插至双链 DNA DNA , ,经改装的带有冷 D 的的 PCR PCR 仪检测样品的荧光强度仪检测样品的荧光强度?? PCR PCR 循环循环 = = 双链双链 DNA = DNA = 染料染料 = = 荧光荧光?后来用与双链双链 DNA DNA 有更强结合力的有更强结合力的 SYBR Green I 取代 EB 荧光定量实时荧光定量实时 PCR PCR 与普通与普通 PCR PCR 的比较的比较??实时在线监控实时在线监控对样品扩增的整个过程进行实时监控,能够实时对样品扩增的整个过程进行实时监控,能够实时地观察到产物的增加,直观地看到反应的对数期地观察到产物的增加,直观地看到反应的对数期??降低反应的非特异性降低反应的非特异性使用引物和荧光探针同时与模板特异性结合,提使用引物和荧光探针同时与模板特异性结合,提高了高了 PCR PCR 反应的特异性反应的特异性??增加定量的精确性增加定量的精确性全程监控,准确的算法进行定量全程监控,准确的算法进行定量??结果分析更加快捷方便, 结果分析更加快捷方便, 无需跑胶无需跑胶罗氏产品介绍以及与罗氏产品介绍以及与同类产品之间的对比同类产品之间的对比一、一、 和和 LightCycler LightCycler 荧光定量荧光定量 PCR PCR 系统系统 Lightcycler Lightcycler 结构分析结构分析以空气加热及冷却迅速改变温度带有极高表面积/容量比例的密封 20 ?l毛细管加热线圈可容纳 32 个样品的卡盘将荧光仪定位的分档器发动机将样品置于光学仪上的分档器发动机热室风扇滤器免维护的 LED 光源光学倍增管 Light Light c c ycler ycler 结构分析结构分析空气加热系统 LED 激发光源 PMT 检测系统光纤热力学结构热力学结构特点: 特点: 1 1、空气加热、空气加热 2 2、毛细管反应体系、毛细管反应体系优点优点: : 1 1、升降温速度快( 、升降温速度快( ℃℃ -20 -20 ℃℃/ /秒), 秒), 2 2、体系均一,不存在边缘现象、体系均一,不存在边缘现象 3 3、把反应体系缩小到、把反应体系缩小到 0-20ul 0-20ul ,节省试剂成本,节省试剂成本实现快速实现快速 PCR PCR 光学结构光学结构特点: 特点: 1 1、、免维护的免维护的 LED LED 冷光源,寿命长达冷光源,寿命长达 2 2万小时以上万小时以上 2 2、光学倍增管( 、光学倍增管( Rodenstock Rodenstock ) ) 3 3、多达、多达 6 6通道( 通道( )和)和 3 3通道( 通道( )实时检)实时检测测优点: 优点: 1 1、毛细管光学特性将光线散射、衍射降至最低, 、毛细管光学特性将光线散射、衍射降至最低, 避免避免 LED LED 功率低的问题功率低的问题 2 2、免维护,带自动检验功能、免维护,带自动检验功能 3 3、轻易实现内标、内对照及多重、轻易实现内标、内对照及多重 PCR PCR