PGA固定化及其基因真核表达研究.pdf

东北林业大学
硕士学位论文
PGA固定化及其基因的真核表达研究
姓名:陈文颖
申请学位级别:硕士
专业:微生物学
指导教师:赵敏
20070601
摘要水解生成;嗝顾魍樗,巧牒铣汕嗝顾氐闹匾V小喊譐体。因基因克隆至启动子控制下的表达载体校菇吮泶镏柿斜泶铮玫株重组三株巨大芽孢杆菌的蛐蛄斜榷裕硐殖龊芨叩耐葱裕直鸫锏%、霉紊酰化酶的固定化研究,优化了固定化参数:给酶量为关键词青霉素酰化酶:酿酒酵母:基因表达;固定化青霉素;.虺芇梢源呋嗝顾谿此,哂兄匾5墓ひ导壑怠本文根据幸延械木薮笱挎吒司鶳基因序列设计了上下游引物,通过┰=玫腜甈,并转化进酿酒酵母菌株、T诓恍枰1揭宜嵊盏嫉姆⒔团嘌校谂嘌褐胁獾搅饲嗝素酰化酶活性,其中的酶活最高,达到痬H绻俳蟹⒔团嘌扔呕有提高酶活量的潜力。将甈进行测序,并将测序结果与幸延衅渌固定青霉素酰化酶在工业生产半合成抗生素中具有重要作用,本实验还采用包埋法将无机磁性粒子。与有机材料海藻酸钠结合起来形成的一种复合磁性微胶囊,表面含有特征性功能基团。从而有效提高固定化青霉素酰化酶的稳定性和回收率。通过对青痝谠靥,反应时『.%.活性回收率为.%,水解反应的最适为,最适温度为℃,且固定化酶的储存和多次实验操作稳定性良好。除此之外,测定了酶促反应的动力学常数:%。疘和川。珽
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导师签名:迎次学位论文作者签名:豫丧粗学位论文作者签名:牢钠签字期渺甓嘣氯缛签字日期:矽年占月矽日独创性声明学位论文版权使用授权书警字日期:┡誊憧梢越宦畚牡娜ú炕虿糠帜谌荼嗳胗壅些盐些盘茎本学位论文作者完全了解盘蜒涡┡烫茫泄乇A簟⑹褂醚宦畚牡墓本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知,除了文中特别加以标注和致谢的地方外,论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果,也不包含为获得或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均己在论文中作了明确的说明并表示谢意。定,有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘,允许论文被查阅和借阅。本人授权关数据库进行检索,可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、‘汇编学位论C艿难宦畚脑诮饷芎笫视帽臼谌ㄊ宦畚淖髡弑弦岛笕ハ颍工作单位:通讯地址:邮编:文。电话:‘
,其系统名是青霉索氨基水解酶...,但习惯名如青霉素酰化酶、青霉素氨基/酰基转移酶继续被沿用。最早从分离得到。现已在多种微生物体内发现有该酶存在,如各种细菌、放线菌、真菌、酵母等АG嗝顾仵;酶在偏碱性环境下可以催化青霉素屯锋呔谿水解,制备生产半合成,.内酰胺类抗尘素所需的中间体:..发生酰基化反应制备半合成抗生素,因此诳冢邗0防嗫股毓ひ抵邪缪萘思渲匾5慕巧āG嗝顾仵;酶催化反应大致可以分为三类【:①酰胺的水解:②酯类的合成;④酰胺的合成。根据催化水解底物不同,可将该酶分为三类孩偎馇嗝顾谿的青霉索酰化酶称为青霉素;虺芇篅水解青霉素那嗝顾仵;赋莆G嗝虺芇、,;⑦水解的青霉袭酰化酶称为酰化酶虺艫。兰氏阴性菌的大肠杆菌青霉素酰化酶、类粪产碱卡嗝顾黪;浮⒖死撞锨霉素酰化酶丫寺〉酱蟪Ω司薪辛酥刈楸泶铮⒉舛诵蛄小K淙豢股毓ひ柬源詐⑽露取⒂蟹芗恋鹊奈榷ㄐ苑浅8遬@玫鞍佣蛊渚哂型锋呔谻酰化酶活性的工作也取得了~些进展冉ɡ资掀章尥撬咕嗝顾谿酰化酶基因克隆到大肠杆菌中进行表达,酶活有大幅度提高青霉素;及来源的青霉素;已克隆暮胁嗔唇岷衔坏愕难腔暮写呋坏愕难基,、,经年,⑾至饲嗝顾谿。它高效广谱的抗菌效果使之在临床中素;青霉素酰化酶主要有两种来源,革兰氏阴性菌和革兰氏阳性菌,其中四种来源于革上主要采用来源的瞧渌妇丛吹腜具有其他不同性质,如来源梢宰饔糜诓煌掷嗤锋呔,和来源梢栽贐中表达并分泌至胞外质工程手段改造只、畍⑶襪丛吹并测定全部序列。其中。结构和功能研究比较清楚的是来源的个亚基组成:—过后加工,去除信号肽和连接肽,产生涂谘腔樽俺捎谢钚缘腜。广泛使用,但是在其使用过手【许多微,锒郧噻偎夭四鸵┬裕贾虑嗝拱窯和青霉素窒妇纳鄙肆υ嚼丛饺酢2⑶矣捎谇嗝顾谿在剧·不、,
嘲铽㈢。嗝顾仵;傅幕蚪峁购捅泶锏骺稳定,需要注射等原因,因此需要对青霉素懈脑。为了使邗0防嗫股鼐有新的疗效,可以在保持其抗菌结构母核的前提下,改变其侧链,使其成为对细菌敏感的具有疗效不同、作用时煌目股亍T缭甏鸵延梦⑸镒