MS培养基配方.docx

MS培养基母液的配制:
20 HMs 大量元素(1 L): 38 g KNO3, 33 g NH4NO3, g CaCl 2 2H2O, g MgS0 4 7H2O, g KH 2P04。
200>MS 微量元素(1 L): g KI , g H3BO3, g MnS0 4 4H2O, g ZnS0 4 7H2O, g Na 2M004 2H2O, g CuS0 4 5H2O, g C0CI2 6H20。
200 >MS维生素和氨基酸(1 L) : 20 g肌醇， g烟酸， g盐酸叱哆醇 (VB6) , g 盐酸硫胺素(thiamine hydrochloride, VB1) , g 甘氨酸。
200>MS 铁盐(1 L): g FeSO 4 - 7H2。， g Na 2EDTA -2H20,先溶 于500 mL ddH 20,加热，,定容至1 L。
汪忠：
配制大量元素母液时，为避免产生沉淀，要用纯度高的重蒸储水溶解，药品 采用分析纯。化学药品先以少量重蒸储水充分溶解后然后混合， 混合时需注意边 搅拌边混合。CaC12 2H20要在最后单独加入，在溶解 CaC12 2H20时，蒸储水 需加热沸腾，除去水中的C02,以防沉淀。
配制铁盐母液时，FeS0 4和Na2-EDTA应分别加热溶解后混合，并置于磁 力搅拌器上不断搅拌至溶液呈金黄色(约加热20-30 min)，调pH值至5 .5,室温 放置冷却后，再冷藏。
使用上述配好的母液，按口^稀释倍数，配制基础 MS培养液：
1 >MS大量元素，1 >MS微量元素，1 >^MS维生素和氨基酸，1 >MS铁盐， 蔗糖30 g/L , ,高温高压灭菌。 g/L或琼月旨9 g/L。
另 MS 基本培养基可用 Murashige and Skoog Basal Salt Mixture （Sigma-Aldrich）
快速配制。
播种方法：
将烟草种子在自然条件下进行浸种处理 （无菌水中浸泡100h）,自然晾干后 依次用7SB （ 70%）和汞（%）进行消毒处理，最后用无菌水洗涤 3-5次， 彻底清除残留于种子表面的汞。将消毒后的种子在无菌条件下播于 MS固体培养 基上，放入（25 i2）C的光照培养箱中培养。培养30d后取样测定。
配制培养液：
.溶化琼脂 用粗天平分别称取琼脂 9 g、蒸糖30 g,放入1 000 mL的搪瓷量杯中，再加入
蒸储水750 mL ,用电炉加热，边加热边用玻璃棒搅拌，直到液体呈半透明状。然后再将配
好的混合培养液加入到煮沸的琼脂中，最后加蒸储水定容至 1 000 mL ,搅拌均匀
.需要注意的是，在加热琼脂、制备培养基的过程中，操作者千万不能离开，否则沸腾的琼
脂外溢，就需要重新称量、制备。此外，如果没有搪瓷量杯，可用大烧杯代替。但要注意大
烧杯底的外表面不能沾水，否则加热时烧杯容易