巨龙竹AINTEGUMENTA基因的克隆和分析.pdf

西南林学院2009届硕士研究生学位论文巨龙竹AINTEGUMENTA基因的克隆和分析 Cloning andAnalysis forAINTEG UMENTA Gene ofDendrocalamUS sinicus 指导教师: 学位授予单位: 张绍智刘小烛教授西南林学院云南·昆明石陶·昆明声明本人声明所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知,除了文中特别加以标注和致谢的地方外,论文中不包含他人已经发表或撰写过的研究成果,也不包含为获得西南林学院或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料,与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。躲堑竺签吼蝉丝关于论文使用授权的说明本人同意:西南林学院有权保留论文的复印件,可以采用影印、缩印或其他复制手段保存论文;提交论文一年后,允许论文被查阅和借阅,学校可以公布论文的全部或部分内容。(保密的论文在解密后应遵守此规定) 日期j埤兰;望用范围,工业化利用价值很高,所以对其生长发育相关基因的研究是很有运用前景的。基于巨龙竹独特的秆茎生长特性以及国外关于ANT基因对植物器官生长调控的研究结果,研究试验对巨龙竹进行了ANT基因的克隆和分析。研究试验首先采用两种植物总RNA抽提试剂,成功地提取到了完整性较好、浓度较高的巨龙竹总RNA;并且应用生物软件DNAMAN和PrimerPremier5设计了同源简并引物以及基因特异性引物;然后运用RT-PCR技术与RACE技术结合的方法成功地克隆到了1914bp巨龙竹ANT基因的全长eDNA序列。由全长eDNA序列可知, 所克隆巨龙竹ANT基因的mRNA序列含有不太明显的5’端“帽子"结构和3’端poly(A) “尾巴",这与真核生物mRNA特征相符。根据所克隆的巨龙竹ANT基因eDNA序列,运用生物学软件和生物信息学的方法对其进行了大量的分析研究。分析预测得出,巨龙竹ANT基因的mRNA序列与水稻、拟南芥、蓖麻等多种植物的ANT基因mRNA序列和刎M陋G明往.Ⅳ mRNA序列有着很高的序列相似性;并且含有一个836bp的开放阅读框j其起始密码子为ATG,终止密码子为"认,编码一个含有278个氨基酸残基的蛋白质,即巨龙竹ANT蛋白。巨龙竹ANT蛋白与水稻、拟南芥、烟草等多种植物ANT蛋白和 ,,,分子式为C1315H2047N3830422S12,,而是留在细胞质中经过翻译后修饰加工成为成熟蛋白质直接发挥其独特的生物学功能。该蛋白属于亲水可溶性蛋白质。二级结构预测分析表明,ANT蛋白由26%、23%、20%%的无规则卷曲组成,,。该蛋白含有两个功能结构域,其中一个属于AP2蛋白家族成员, 另一个是未知结构域。克隆试验和预测分析结果充分表明,研究试验成功克隆得到巨龙竹ANT基因, 该基因可以用于后续研究。本研究为今后研究巨龙竹速生与巨大的分子机制铺垫了很好的基础。关键词:巨龙竹:彳刷疆G明涩lM盟基因;基因克隆;RT-PCR:RACE Abstract Abs仃act Proliferation,expanding andenriching ofplant cells contribute totheprocess ofplant growth,SO theproliferation ofplant cellsistheincreaseofquality,the growth andthe development is aspecialgene inplant which regulates cellproliferation an growth bymaintaining petence anogenesis,it isplay animportant roleinexpanding an growth and plantdevelopment. Dendrocalamus sinicus has agrowth characteristicoflarge sizeandrapidlygrowth,it is considered thehighestbig bamboo base on themechanism ofANT function angrowth,infer thatANT play a