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伤寒沙门菌质粒对 DC 成熟及其自噬过程和免疫功能的影响中文摘要




SOOCHOW UNIVERSITY
博士学位论文

伤寒沙门菌质粒对 DC 成熟及其自噬过程和免疫功能
论文题目
的影响

研究生姓名韦莉
指导教师姓名黄瑞
专业名称病原生物学
研究方向抗感染免疫
论文提交日期 2013 年 3 月
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伤寒沙门菌质粒对 DC 成熟及其自噬过程和免疫功能的影响中文摘要

中文摘要

伤寒(typhiod fever)又称为肠热病(enteric fever),是一种古老的由伤寒沙门
菌(Salmonella typhi,)引起的急性肠道传染病。20 世纪 80 年代末至 90 年
代初,我国十三省市曾发生大规模多重耐药伤寒沙门菌的暴发流行。对 591 例伤
寒沙门菌临床分离株进行药敏、质粒电泳、接合转移、转化及消除试验后发现,
流行期间分离的多重耐药菌株均含一分子量 ×106 道尔顿( Md,约 159 Kb)
的耐药质粒,可编码对多种药物的抗性,属不相容性 C 群(),称之为 pRST98。
该质粒具有多效性,除编码抗药性外还能增强宿主菌的毒力,是一种既能介导细
菌耐药性又能增强细菌毒力的具有双重功能的“嵌合型”质粒。伤寒沙门菌是兼
性胞内致病菌,具有靶向感染专职抗原提呈细胞(antigen presenting cell,APC)
的特点,侵入机体后可定居在树突状细胞(dendritic cell,DC)内生长繁殖。DC
是连接天然免疫和获得性免疫的桥梁,在抗沙门菌感染免疫反应中起着关键作用,
任何对 DC 功能的干扰都可能影响感染结局。
本研究通过建立沙门菌感染的细胞模型和实验动物模型,研究伤寒沙门菌质
粒 pRST98 对 DC 成熟及其自噬过程和免疫功能的影响,揭示其增强宿主菌毒力的发
生机理,为下一步继续深入研究质粒的毒力机制提供实验和理论依据。
第一部分伤寒沙门菌质粒对 DC 成熟和自噬过程影响的体外实验
以携带 pRST98 的野生株 -WT 、消除 pRST98 的伤寒沙门菌突变株
-Δ-pRST98 以及 pRST98 经接合转移重新导入 -Δ-pRST98 所获得的回补株
-c-pRST98 为研究对象,将细菌与小鼠骨髓来源的 DC(bone marrow-derived
DC,BMDC)共培养建立体外感染模型。分别在感染的不同时间段(2 h、4 h、12
h 和 24 h)收获细胞,采用以下方法进行实验检测:①流式细胞术(flow cytometry,
FCM)检测 DC 表面共刺激分子 CD40、CD和 CD86 的表达以及 DC 的吞噬能力;
②酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测细胞 Th1
型细胞因子γ-干扰素(Interferon-γ,IFN-γ)和白细胞介素-12(interleukin-12,IL-12)
及 Th2 型细胞因子 IL-10 的表达;③ Western Blot(WB)检测细胞自噬标志蛋白
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中文摘要伤寒沙门菌质粒对 DC 成熟及其自噬过程和免疫功能的影响
——微管相关蛋白 1 轻链 3-II(Microtubule-associated protein 1 light chain 3-II,
MAP1-LC3-II,即 LC3-II)和 Beclin-1 的表达;④透射电镜(transmission electron
microscope,TEM)观察细胞内自噬小体。
实验结果表明,① -WT 感染组 DC 表面 CD40、CD和 CD86 的表达
量均显著低于 -Δ-pRST98 感染组(P<,P<,P<);-c-pRST98
感染组与 -Δ-pRST98 感染组比较,CD和 CD86 的表达量均显著低于
-Δ-pRST98 感染组(P 均<); -WT 感染组和 -c-pRST98 感染组
DC 的吞噬率均显著高于 -Δ-pRST98 感染组(P 均<); ② -WT 感染
组 DC 的 IFN-和 IL-12 的分泌量均显著低于 -Δ-pRST98 感染组(P 均<),
而 IL-10 分泌量显著高于 -Δ-pRST98 感