舒芬太尼对人脐血树突状细胞免疫功能的影响.pdf

河北医科大学硕士学位论文舒芬太尼对人脐血树突状细胞免疫功能的影响姓名:马灵申请学位级别:硕士专业:麻醉学指导教师:邢玉英 20090301 中文摘要舒芬太尼对人脐血树突状细胞免疫功能的影响摘要目的:树突状细胞是与机体免疫功能密切相关的抗原提呈细胞,是目前已知抗原提呈能力最强的专职抗原提呈细胞;肿瘤患者免疫功能普遍低下,各种麻醉方法和药物对肿瘤患者免疫功能的影响也不容忽视。本研究排除手术创伤、应激反应等影响因素,以脐血单个核细胞为来源,体外定向培养树突状细胞,从细胞水平探讨舒芬太尼对树突状细胞增殖与免疫功能的影响。方法:无菌条件下采集健康孕妇正常胎儿脐带血70ml 左右,用肝素抗凝。在超净工作台下用生理盐水:脐带血为 1:1的比例稀释后,再按照稀释血:淋巴细胞分离液之比为 2:l的比例缓缓加到淋巴细胞分离液上层,密度梯度离心法获得脐血单个核细胞(CBMC),将细胞用生理盐水清洗3次后弃上清加入无血清培养基计数单个核细胞。调整细胞数量为2×106/ml,接种于24孔培养板中,每孔2ml。在37℃、 5%C02培养箱中孵育2h,移去悬浮细胞,保留贴壁细胞, 调整细胞数量为l×106/ml。然后分组进行培养:阴性对照组(DC(.))、阳性对照组(DC(+))和药物组(DC(Suf))。 DC(.、)组:只加入重组人类粒细胞集落刺激因子()50ng/ml和人类白介素一4()10ng/ml培养 10d,DC(+)组:、()50ng/ml培养10d诱导成熟DCs:DC(Suf)组:、(、、1)ng/ml(、、S1) 培养10d。培养过程中在倒置显微镜下观察细胞生长情况及形态学变化。培养到第10d时收集细胞以流式细胞分析仪分析各组细胞免疫表型CD80、CD86、CD83、HLA—DR(、)分子的表达,收集培养到第10d的各组细胞培养上清用双抗体夹心免疫(ELISA) 法测定其分泌IL一12的水平。取健康志愿者外周血20ml, 同上述方法制备外周血单个核细胞(PBMC),加入含有10% 小牛血清的RPMll640培养液,在培养箱中培养2h,收集悬浮细胞作为同种异体混合淋巴细胞,×106 /ml,用RPMll640培养基培养7d作为反应细胞,培养到第 10d的各组DCs作为刺激细胞,用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测DCs刺激混合淋巴细胞的增殖能力。结果: 1舒芬太尼对DCs培养形态的影响:三组细胞培养24h 后在倒置显微镜下观察各组DCs可见少量悬浮细胞,但大部分仍贴壁生长并聚集成簇;培养48h后形态不规则悬浮细胞增多。与阴性对照组相比,阳性对照组和药物组细胞培养5d 后其形态变为不规则形,细胞周围出现细小的树突样伪足; 培养10d后细胞体积增大可见典型树突样突起,但与阳性对照组相比,药物组细胞随舒芬太尼浓度增加树突状伪足逐渐不明显。 2舒芬太尼对DCs免疫表型的影响:和阴性对照组比较,阳性对照组和药物组的表面标志物CD80、CD86、CD83 和HLA—DR分子的表达均较阴性对照组增加(P<),但药物组表达低于阳性对照组(),且呈不典型的剂量依中文摘要赖性下降趋势。 :和阴性对照组比较,阳性对照组和药物组的DCs分泌的IL一12 均增加(尸<),±、±、±、 ±;药物组各浓度之间比较差异无统计学意义(尸> )。 4经舒芬太尼刺激后的树突状细胞对刺激混合淋巴细胞增殖反应的影响:成熟DCs对混合淋巴细胞具有很强的刺激增殖作用,而未成熟的DCs刺激T细胞增殖作用较弱,阴性对照组细胞处于不成熟阶段对混合淋巴细胞的刺激能力较弱。药物组和阳性对照组细胞能促进同种混合淋巴细胞增殖但随药物浓度增加刺激能力逐渐下降且低于阳性对照组(尸<)。结论:脐血来源的单个核细胞可在舒芬太尼的刺激下诱导为成熟的树突状细胞,且舒芬太尼对树突状细胞的成熟和免疫功能的影响具有不典型的剂量依赖性下降趋势, 的分泌与剂量无关。关键词:舒芬太尼;麻醉;免疫功能;树突状细胞;脐血单个核细胞英文摘要 Effects ofsurentanil on theimmune function of dendritic cellsfrom umbilical cord blood ABSTRACT Objective:The dendritic cellhas a close