肝癌转移亚细胞系的建立及分离肝癌转移相关基因和蛋白的研究摘要
摘要
肿瘤转移研究是当今肿瘤研究中的热点。建立理想的肿瘤转移动物模型和获得具
有高转移能力的肿瘤细胞株将为研究肿瘤转移分子机理的研究提供实验材料,具有重
要的价值。在此基础上,可进一步筛选与肿瘤转移相关的基因和蛋白。本研究将肝癌
细胞接种鼠,进而筛选和建立了肝癌转
移亚细胞系,使该细胞系与其亲本细胞系形成了配对关系,通过比较亲本细胞系与转移
细胞系,进行筛选肝癌转移相关基因和蛋白的研究。
本研究采用人肝癌细胞腋后背部皮下接种工鼠,接种后天时成瘤,
接种后天时,在荷瘤鼠赢弱时引颈处死,取其肺组织,进行原代和传代细胞培养,
传代代以后,细胞形态不变,且可以连续传代,将该细胞系命名为。然后,
对细胞进行了生物学鉴定,检测了细胞形态、染色体、细胞动力学、细胞周
期、甲胎蛋白表达、癌基因表达、转移相关基因表达和细胞回接鼠成瘤实验等指
标。结果显示细胞的生长、增殖和形态等与亲本细胞十分相近,其染色
体形态仍为人类核型,众数维持在之间,占检测细胞甲
胎蛋白的表达,结果为阳性。检测结果显示与细胞相比,
细胞癌基因。表达水平较高,转移抑制基因的表达水平明显下调,确定
细胞为亲本细胞的亚克隆细胞。应用鼠筛选获得的肝癌转移亚细
胞系,与亲本细胞系形成了配对关系。
在上述研究基础上,本研究采用配对细胞和,运用差异显示
技术筛选差异表达的基因。结果筛选出条较明显的差异表达片段,将
其中一条在细胞中表达较高的差异片段和一条在细胞中表达较高
的差异片段进行克隆和测序,测序结果与进行同源比较,显示片段为
结合蛋白,片段为。然后,又经和进一步证实,
显示与结果相符。有文献报道,结合蛋白能够影响的稳定性,
在调节细胞转运方面具有重要的作用。为结合蛋白,与细胞内物质运
输、蛋白分选相关,而且与信号传导、受体下调和病原体吞噬有关。本研究发现在
细胞中结合蛋白表达上调,表达下调,提示结合蛋白和
可能与肝癌转移有关。
南开大学硕士研究生毕业学位论文
肝癌转移亚细胞系的建立及分离肝燕转移相关基因和蛋白的研究摘要
本研究进一步运用蛋白质组学技术从蛋白水平上分离肝癌转移相关蛋白。运用二
维电泳技术,比较了细胞和亲本细胞的全蛋白,发现个在
细胞中上调表达的蛋白质点,分别标记为和,差异蛋白质点经
工一质谱分析后,通过与蛋白数据库比较,初步确定为原肌球蛋白
为波形纤维蛋白为热休克蛋白
。原肌球蛋白是肌动蛋白的结合蛋白,波形纤维蛋白是一种细
胞骨架蛋白,热休克蛋白是一种肿瘤相关蛋白,三种蛋白在肝癌转移细胞的
上调表达,提示可能与肝癌转移有关,其功能有待于进一步证实。
关键词肝癌肿瘤转移差异筛选蛋白质组学肿瘤转移相关基因肿瘤转
移相关蛋白
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肝癌转移亚细胞系的建立及分离肝癌转移相关基因和蛋白的研究
沙
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肝癌转移亚细胞系的建立及分离肝癌转移相关基因和蛋白的研究
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肝癌转移亚细胞系的建立及分离肝癌转移相关基因和蛋白的研究缩写词表
缩写词表
简称英文名称中文名称
鼠严重联合免疫缺陷鼠
甲胎蛋白
无特殊病原体
苏木精伊红
碘化丙吮
磷酸缓冲液
二甲基亚矾
澳化乙锭
乙二胺四乙酸
异丙基硫代一半
乳糠昔
固相梯度
牛血清白蛋白
二维电泳
质谱
外周型原始神经外胚
层瘤
热休克蛋白
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肝癌转移亚细胞系的建立及分离肝癌转移相关基因和蛋白的研究前言
前言
肿瘤转移
肿瘤转移是成功治疗肿瘤的最大障碍,也是造成肿瘤患者死亡的主要原因之一
当今肿瘤学的最大挑战仍然是防止肿瘤的转移和扩散。有关转移分子机制的研究表明,
它是一个多阶段复杂的过程,受许多特殊基因的调控,它们或被激活,或被抑制,相互
协同或拮抗,最终影响肿瘤细胞的生物学特性。探讨与肿瘤转移相关的因素,寻找预防
和治疗的有效途径,是目前肿瘤学研究的一项重要课题。
月中瘤转移的分子基础
从病理过程看,肿瘤转移是癌细胞与宿主细胞相互作用的连续复杂过程,主要包
括以下几个步骤原发肿瘤细胞从原部位脱落,侵入细胞外基质并与基底膜
中大分子蛋白
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