地高辛标记及检测试剂盒ipod说明书.doc

1 DIG Random Labeling and Detection Kit Ⅰ( POD ) (for color detection with DAB ) DNA 探针标记和检测试剂盒Ⅰ产品编号: MK1008 保存期:一年-20 ℃冰冻保存。用途:用于 DNA 探针的随机引物标记及各种膜上杂交和原位杂交。工作量: 可用于标记 —3μg 的探针 6 次及 1000 张切片的原位杂交或 12次 10× 10 cm 膜上杂交检测。原理所谓 DNA 探针, 实质上是一段已知的基因片段, 应用这一基因片段即可与待测样品杂交。如果靶基因和探针的核苷酸序列相同,就可按碱基配对原则进行核酸分子杂交,从而达到检查样品基因的目的。在随机引物法标记反应液中,有随机合成的六聚体核昔酸(hexanucleotide) 作为引物, dATP 、 dCTP 、 dGTP 、 dTTP 和 D1G-11-dUTP 作为合成底物,以单链 DNA 作为模板,在 Kl enow 酶的作用下,合成掺入地高辛的 DNA 链。以地高辛标记的探针与靶基因 DNA 链杂交后,再通过免疫反应来进行检测。一般通过酶标抗地高辛抗体来检测,就可以肯定杂交反应的存在。免疫检测采用过氧化物酶系统, DAB 显色。敏感性很高。可用于膜上杂交和原位杂交。试剂盒内容: Random Labeling Mix( 高效), 25μl 2. Biotin — Mouse A nti — Digoxin 2 00μl 3. SABC — POD 2 00μl 4. DAB Stock Solution 5 ml 5. Blocking Reagent , 5g 特点: (1) 标记属高效标记反应。以1μg DNA 探针为例,1 小时反应即可产生 μg 标记探针, 20小时可产生 2μg 左右的标记探针。(2) 试剂将标记反应所需的引物、核苷酸、 DIG-11dUTP 和 Klenow 酶等混合在一起。一次标记只需吸取一次标记液,使用至为简便。(3) 标记反应适于下述对象: 从 10ng —3μg。 b. 不等的 DNA 长度 100bp — 10kb 。 c. 线形排列或呈高度卷曲之 DNA 。 d. 低融点琼脂中的 DNA 。(4) 检测系统抗体为抗地高辛单抗+SABC 。抗地高辛单抗标记生物素, 效价 1:1 000 -2000 ( 膜上杂交)或 1: 10 00 (原位杂交) 。(5) 显色剂为 DAB ,非常稳定。用时 1:40 稀释。(6) 试剂盒敏感性达到 ,足够检测出 1μg 基因组 DNA 中的单个基因。(7) 除用于各种膜上杂交之外,还可用于原位杂交(ISH) 。操作程序一随机引物标记操作程序如下: 2 ①用灭菌去离子蒸馏水稀释 1μg DNA 至总体积 16μl。② DNA 热变性:把 DNA 瓶置于沸水中,水浴 10 分钟。然后,迅速地插入碎冰中 3 分钟以上。③加4μlDIG Random Labeling Mix( 高效), 混匀后再离心 200 0 / ×5 分钟。④置 37℃反应至少 120 分钟。时间越长, 产量越高。延长反应时间至 20 小时可明显增加地高辛标记 DNA 的产量。应根据需要控制反应时间。⑤加入 2μ1 1