实验设计作业骆德强.doc

实验设计作业骆德强.doc2015 研 3 班 406521815156 骆德强
实验设计作业
题目预设：
（1） A药物具有在心肌细胞缺血再灌注损伤中的作用
（2） 心肌细胞缺血过程中B基因的表达产物B蛋白表达量会发生改变 研究目的：
（3） B基因的表达产物与心肌细胞缺血间的关系
（4） 在A药物保护心肌细胞免受缺血再灌注损伤的过程中，B基因的表达产物 是否参与其中
背景资料1：
心肌缺血，是指心脏的血液灌注减少，导致心脏的供氧减少，心肌能量代 谢不正常，不能支持心脏正常工作的一种病理状态。心脏的供血不是一成不变的， 而是始终存在着波动，但这种波动经过机体自身调节，促使血液供需相对恒定, 保证心脏正常工作。如果任何一种原因引起心肌缺血，经机体调节不能满足心脏 工作需要，这就构成了真正意义上的心肌缺血。
心肌缺血对心脏和全身都可能带来许多不利影响。氧是心肌细胞活动必不可 少的物质，而氧是通过血液输送给细胞的。心脏没有“氧仓库”，完全依赖心肌 血供，所以一旦缺血，立刻会引起缺氧。缺氧的直接后果是心肌细胞有氧代谢减 弱，产能减小，使心脏活动时必需的能量供应不足，引起心绞痛、心律失常、心 功能下降。同时，代谢的废物也不能被有效及时地清除，易产生不利影响。缺氧 会导致炎症、凋亡、氧化，最终会影响心脏的收缩功能。若有20%〜25%的心 肌停止收缩，通常会出现左室功能衰竭；若有40%以上的心肌不能收缩，就会 有重度心泵功能衰竭。如果这种情况突然发生,就会出现非常危险的心源性休克。 急性心肌梗死就常与这种情况相关
心肌缺血还会损害舒张功能。收缩不良和舒张不良结合起来，易导致心室充 盈压升高，引起肺充血，还可引起复杂的物质代谢紊乱和心肌电活动失常。
总结：心肌缺血导致的主要后果是心肌缺氧。
背景资料2：
异丙肾上腺素（ISO）诱导的心肌缺血动物模型广泛用于心肌缺血研究和药效评 价。具体建模方法见实验设计。
题目分析：
（1） B基因的表达产物与心肌细胞缺血间的关系：B基因表达产物为B蛋白， 因此可以使用免疫细胞化学法来显示B蛋白。具体细节详见免疫组化操作 方法。心肌细胞缺血模型与正常模型的差别可能有两种情况，一种是B 蛋白增多，另一种是B蛋白减少。
（2） A药物发挥作用时候B基因是否参与其中：参与其中有两种含义，第一种 是A药物导致B基因表达发生改变，第二种是A药物和B基因共同作用， 但是二者没有因果关系。区别二者仅需通过对照实验即可证实。
结果猜想：
心肌缺血导致B基因活化，B蛋白增多：
（1） B蛋白会降低心肌细胞对氧气依赖，使心肌细胞对能量的需求得到一定程 度的补偿，比如B蛋白是促进心肌无氧呼吸的蛋白。
（2）
B蛋白是心肌正常工作需要的蛋白，与心肌功能密切相关。由于缺氧使得B 蛋白功能下降，为了维持心肌的功能，发生代偿反应，使得B蛋白增多，来弥补 B蛋白的功能降低。
心肌缺血导致B基因活性降低，B蛋白减少：
B蛋白是心肌正常工作需要的蛋白，与心肌功能密切相关。由于缺氧使得B蛋白 功能下降，而B蛋白功能下降直接导致心肌功能下降。
A药物的作用：
（1） 为心肌提供一定的氧气。
（2） 为心肌直接提供能量。
（3） 与B基因有关。
实验设计：
一、 动物疾病建模
（1） 试剂：盐酸异丙肾上腺素注射液
（2） 实验动物