实验八 核糖核酸的组分鉴定.ppt

实验八核糖核酸的组分鉴定一、实验目的 。 。核糖核酸的组成成分主要包括核糖、磷酸和碱基。 5’5’ 3’3’ RNA 含量为干菌体的 %~% , 二、实验原理 ,嘌呤碱能与银离子反应形成沉淀,但此处碱性环境不能用一般的强碱,否则强碱会与银离子反应产生沉淀而干扰结果判定。 3. 核糖核酸与浓盐酸共热时,会发生降解,形成的核糖继而转变成糠醛,后者可与 3,5-二羟基甲苯(地衣酚)反应,在 Fe 3+或Cu 2+催化下,生成绿色复合物。 4. 磷酸组分可与定磷试剂在酸性环境中反应,生成蓝色物质。因此,可以根据以上性质,设计实验对各组分进行鉴定。(1) 硫酸; (2) 硝酸银溶液; (3) 1mol/L 浓氨水; (4)三氯化铁-浓盐酸溶液: (5)地衣酚-乙醇溶液: (6)定磷试剂: 17% 的硫酸, 10% 的抗坏血酸和 % 的钼酸铵。三、试剂 1. 取100mg 实验七中提取的酵母 RNA ,加入 H 2SO 4 溶液 5mL ,在沸水浴中加热 10-20 分钟,使核酸充分水解后,用于对各组分的鉴定。 2. 磷酸组分鉴定:取水解液 1mL ,加入干净的试管中, 再加入等体积的新配制的定磷试剂 1mL ,混匀后, 在45℃左右的水浴中加热 15-30min ,观察颜色变化。四、实验步骤 3. 嘌呤碱的鉴定:取水解液 1mL ,加入干净的试管中, 加入过量的浓氨水,再加入 1mL 的硝酸银溶液, 观察沉淀的生成。 4. 核糖的鉴定:取水解液 1mL ,加入干净的试管中, 再加入 2mL 三氯化铁-浓盐酸溶液和 苔黑酚-乙醇溶液,放置在沸水浴中加热 10-30min ,观察颜色变化。