实验六细胞核的分离与核酸的鉴定.ppt

实验六细胞核的分离与核酸的鉴定
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、细胞质的方法；
；
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一、分离细胞质与细胞核

细胞破碎的方法
机械法
高速组织捣碎机
玻璃匀浆器
研钵
物理法
超声匀浆器
冻融法
化学法
自溶法
酶处理
表面活性剂处理法
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利用各细胞器在一定介质中的沉降速度的差异，可采取离心的方法，将细胞器分离出来。

细胞器沉降先后顺序先后是细胞核、线粒
体、溶酶体和其他微体、核糖体和大分子。
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离 心 方 法
差速沉降离心法
速率区带离心法
等密度区带离心法
密度梯度区带离心法
√
√
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差速沉降离心法
(differential centrifugation)
采用逐渐增加离心速度或低速和高速交替进行离心，使沉降速度不同的颗粒，在不同的离心速度及不同离心时间下分批分离的方法。
加速
低速
高速
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差速沉降离心法一般用于分离沉降速度相
差较大（一般为10倍）的颗粒。
缺点：①分离效果差，不能一次得到纯颗粒；
　 ②壁效应严重，特别是当颗粒很大或浓度很高 时，在离心管一侧会出现沉淀；
③颗粒被挤压，离心力过大、离心时间过长会使颗 粒变形、聚集而失活。
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每种纯样品成份在介质溶液中的沉降速度可以表为：
V=d2÷18×(σ-s)÷η×ω2r。
V： 是某一时刻样品的沉降速度（厘米/秒）；
d： 样品颗粒的直径（厘米）；
σ：样品颗粒的密度（克/厘米3）；
s： 介质溶液的密度（克/厘米3）；
η：介质溶液的粘性系数（克/厘米·秒）；
ω：离心机重轴的旋转角速度（1/秒），ω=2πN÷60，N：转/分；
r：颗粒所在位置与旋转轴心之间的距离，即离心半径（厘米）；
密度梯度离心法的理论依据
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待分样品的沉浮行为如何确定？
当σ>S时 V>0即样品顺离心力方向沉降σ<S时 V<0即样品逆离心力方向上浮σ=S时 V=0即样品停止沉降或上浮，“稳定”在这一位置用这个公式可以很好地解释在速率区带离心法或等密度区带离心法中单一样品的沉降（或上浮）行为。
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