实验三酵母核酸的制备及成份鉴定.ppt

实验三酵母核酸的制备及成份鉴定
第一页，课件共10页
一、目的
了解核酸的组分，并掌握鉴定核酸组分的方法以
了解苔黑酚定量测定RNA的方法。
第二页，课件共10页
二、原理
酵母核糖核酸中RNA含量较多，RNA可溶于碱性溶液，在碱提取液中加入酸性乙醇溶液可以使解聚的核糖核酸沉淀，即得到RNA的粗制品。
核糖核酸中含有核糖、嘌呤碱，嘧啶碱和磷酸各组分，加硫酸煮沸可使其水解，从水解液中可以测出上述组分的存在。
第三页，课件共10页
磷酸与钼酸铵试剂作用生成黄色磷钼酸，磷钼酸中的钼在有还原剂（Vc）存在时可被还原成蓝色的钼蓝。根据此呈色反应即可鉴定磷酸的存在。
根据嘌呤碱能与硝酸银产生灰褐色的絮状嘌呤银化合物而鉴定。
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根据核糖经浓盐酸或浓硫酸作用则生成糠醛，后者能与3，5二羟甲苯缩合而形成绿色化合物而鉴定。
脱氧核糖在浓酸中生成ω-羟基-γ-酮基戊醛，它和二苯胺作用生成蓝色化合物。
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三、器材
锥形瓶
大研钵
电子天平
离心机
恒温水浴锅
注意仪器使用方法
离心管平衡!!
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四、试剂和材料
酵母粉
M NaOH,95%乙醇, M H2SO4溶液,浓氨水, AgNO3
酸性乙醇溶液：30ml95%。
苔黑酚--FeCl3溶液：将100 mg苔黑酚溶于100ml浓HCl中,，临用时配制。
定磷试剂： 按顺序以A：B：C：蒸馏水＝1：1：1：2（V/V）混匀,现配。A、17% H2SO4：　将17ml浓硫酸缓缓加入83ml水中。B、%（NH4）6Mo7O24：（NH4）4Mo2O7溶于100ml蒸馏水中。C、10%Vc：10g Vc溶于100ml蒸馏水中，用棕色瓶贮存。颜色呈淡黄色时可以使用，如呈深黄或棕色则失效。
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五、操作
1、酵母RNA的提取(2-3人一份) M NaOH溶液中（先以少量 NaOH溶液湿润酵母，并充分研磨)， 将悬浮液转移到250ml锥形瓶中，在沸水浴30分钟，不时搅拌,冷却后转入离心管进行离心 . ----（蛋白质变性沉淀，RNA溶于碱性溶液）
离心10min（4000rpm),将上清液倾入10ml酸性乙醇溶液中，待核糖核酸沉淀完全后，离心3min（4000rpm），弃去上清。 --- RNA不溶于乙醇，pI=）
用95%乙醇洗涤沉淀，离心3min