BPG层析柱标准装柱流程规范.doc

操 作 标 准
目：为了使BPG300层析柱装柱过程可重复，并可以得到较好柱效，故建立此操作规范。
范畴：配合ÄKTA process系统进行有效蛋白质纯化操作。
负责人：层析工序操作人员
原则操作程序：
1 基本术语概念
填料因子（Packing Factor，PF）：指在在装柱过程中，用低流速（如60cm/h）对填料进行沉降压缩得到调料高度和最后装柱完毕时填料高度（柱高）比值，
GEHC生产各种常用填料PF参见《GEHC AxiChrom 300-1000 columns User Manual 28-9562-89 Edition AA》；
线性流速（linear flow rate）：单位时间内液体流经直线距离，惯用cm/h表达；
体积流速（volume flow rate）：单位时间内液体流经空间容积，惯用ml/min表达；
换算：
2 准备工作
检查层析柱完整性，所带配件，与否水平（用水平仪矫正），与否清洁（如有污染应进行清洗）。
拟定所用填料及其特性、浓度等
以DEAE Sepharose Fast Flow填料为例，其填料因子（PF），新填料（slurry）浓度为75%（保存于20%乙醇中），耐压3bar。
拟定放大后工艺参数
以XX生化制药股份有限公司放大工艺为例，
中试工艺参数：
柱高h=10cm；体积流速v1=3ml/min；柱内径d=.
即，线性流速v2=v1/s柱=3/(×) cm/min= cm/min；
样品与填料接触时间t=h/v2=10/=；
在工艺线性放大中h、v2和t均不变，则可保证样品出峰位置（洗脱时间）和形状不变。
使用BPG300层析柱进行放大工艺参数：
装柱体积V柱= S柱h=××1L=7L；
装柱需要slurry体积Vslurry=V柱×PF/Cslurry
以DEAE Sepharose Fast Flow为填料，
则，Vslurry=7×=；
装入柱中slurry高度Lslurry=Vslurry/S柱=/(×)dm==.
3管路安装
层析柱管道和配件安装
，旋松密封调节器，用纯水或20%乙醇充分浸润柱内壁和柱头O型圈；
用扳手对称卸下支持杆连接到法兰螺丝，并通过旋转高度调节手柄将柱头旋至最高处，在柱头顶部依次安装压力表和四路二通阀，在柱底安装四路二通阀；
，另一端连至ÄKTA process上端连接口COLUMN TOP，同步从柱底四路二通阀横向接出一根细管至ÄKTA process下端连接口COLUMN BOTTOM。
图1、BPG300层析柱安装示意图

ÄKTA process进样泵A1和B1进口，两管另一端均放入纯水中；
：打开UNICORN软件，在system control窗口点击manual→valves→InletA，选取inletA1，insert；InletB，选取closed，insert；Column，选取upflow，insert；Pump→Flow，设定流速60L/h，点击execute运营程序充水至BPG柱中2-3cm左右，pause，清除下端筛网中空气，用注射器吸出筛网中残留气泡。
4装填料

所用填料为DEAE Sepharose Fast Flow ，装置是保存于20%乙醇中新slurry；
，，再加入纯水至40cm左右，充分搅拌混匀，同步避免挤压筛网和柱壁，静置使填料界面至少低于38cm；
control窗口点击manual→valves→InletA，选取inletA1，insert；InletB，选取closed，insert；Column，选取downflow，insert；Pump→Flow，设定流速60L/h，点击execute运营程序将柱头上端筛网布满水以除去气泡，再装上柱头，用密封调节器固定柱头，拧紧螺丝；
control窗口点击manual→Pump→Flow，设定流速为42L/h（60cm/h），进行填料沉降，待填料高度降至14cm左右，将密封调节器旋至全松，将柱头迅速调