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水产品中己烯雌酚快速检测方法试验分析
 
 
柳爱春　刘　超　徐晓丹　孔世佳
摘要对一种快速检测水产品中己烯雌酚残留量ELISA方法进行试验分析,结果表明:~,回归方程y=-(x)+,相关系数R2= 8;%~%;回收率为73%~96%;;;操作过程简单,检测成本低,检测时间短,因而该方法适用于大批量水产品中己烯雌酚残留量快速检测。
关键词水产品;己烯雌酚;ELISA;快速检测
S912 A 1007-5739(2009)15-0347-01
己烯雌酚(Diethylstilbestrol,DES)是一种人工合成的雌性激素,应用于水产养殖中能够促进蛋白质同化,提高饲料转化率,同时促进鱼虾类生长。但因其在水产动物中代谢较慢且作用顽强,极小的残留都会对人体生理功能产生影响,主要危害是扰乱人体激素平衡,并具有致癌性,现已被禁止应用于水产养殖中,规定水产品中不得检出己烯雌酚
[1]。为此, μg/kg,欧盟要求以2μg/kg为阳性下限。目前,己烯雌酚常用的检测方法有高效液相色谱法(HPLC)和酶联免疫法(ELISA),但是HPLC法[2]在检出限上不能满足要求;ELISA法[3]是目前水产品中DES残留检测的标准方法,但也存在样品处理过程复杂、检测时间长、成本高等不足。为了寻求一种经济、简便、灵敏、特异性强的测定方法,笔者对一种快速检测水产品中己烯雌酚残留量的ELISA方法进行试验分析,现将结果报告如下。
1材料与方法

Lab system MK3型酶标仪、METTLER PB602-N电子天平、N- EVAP氮吹仪、LRH-150S恒温培养箱、移液器(10μL、20μL、100μL和1mL各1支)、多道移液器(50~300μL)。
美国Bioo MaxSignalTM己烯雌酚ELISA试剂盒、乙酸乙酯、正己烷、无水CaCl2。

。虾、蟹、甲鱼和淡水鱼取肌肉部分,用匀浆器对样品进行匀浆。
。(每个样品称2份),加入9mL乙酸乙酯,,最大速度振荡3min;20℃,6 000rpm离心5min;移取6mL上清液到另一新的试管,氮气吹干。
。加入2mL正己烷溶解样品;加入1mL1×PBS-甲醇(3∶2,V/V),漩涡振荡2min;20℃,6 000rpm离心10min,除去上层正己烷层,部分蟹样再次加入正己烷重新净化1次,取50μL下层溶液进行检测。
。取不同批次的南美白对虾和中华绒螯蟹样品,以20ng/mL的标准溶液分别添加3个不同的浓度水平测试回收率,同时做空白。提取、。
。将Bioo试剂盒从冷藏箱取出,并回温至室温。按说明书稀释抗体、洗液和PBS;根据样品数量确定所需的微孔板数,设计好标准品、质控和样品的排布(每个浓度的标准品和每份处理后待测溶液均设平行双孔);分别加入50μL标准品