如何阅读分析质粒图谱.doc

如何阅读分析质粒图谱.doc如何阅读分析质粒图谱
标签： 图谱 质粒 阅读 2009-09-01 14:12
§ § § §
病毒转基因载体。
，其中质粒DNA是一种新的非
一、一个合格质粒的组成要素
复制起始位点Ori?即控制复制起始的位点。原核生物 DNA分子中只有一个复制 起始点。而真核生物DNA分子有多个复制起始位点。
抗生素抗性基因可以便于加以检测，如 Amp+? ,Ka n+
多?克隆位点MCS克隆携带外源基因片段
P/E?启动子/增强子
Terms终止信号？
加poly( A)信号？可以起到稳定mRNA作用
二、如何阅读质粒图谱
第一步：首先看Ori的位置，了解质粒的类型(原核/真核/穿梭质粒)
第二步：再看筛选标记，如抗性，决定使用什么筛选标记。
Ampr水解B—内酰胺环，解除氨苄的毒性。
tetr可以阻止四环素进入细胞。
camr生成氯霉素羟乙酰基衍生物，使之失去毒性。
neor (kanr)氨基糖苷磷酸转移酶使 G418 (长那霉素衍生物)失活
hygr使潮霉素B失活。
第三步：看多克隆位点(MCS)。它具有多个限制酶的单一切点。便于外源基 因的插入。如果在这些位点外有外源基因的插入，会导致某种标志基因的失活， 而便于筛选。决定能不能放目的基因以及如何放置目的基因
第四步：再看外源 DNA 插入片段大小。质粒一般只能容纳小于 10Kb 的外源 DNA
片段。一般来说，外源 DNA 片段越长，越难插入，越不稳定，转化效率越低。 第五步：是否含有表达系统元件， 即启动子－核糖体结合位点－克隆位点－转录 终止信号。 这是用来区别克隆载体与表达载体。 克隆载体中加入一些与表达调控 有关的元件即成为表达载体。选用那种载体，还是要以实验目的为准绳。 启动子－核糖体结合位点－克隆位点－转录终止信号 启动子－促进 DNA 转录的 DNA 顺序，这个 DNA 区域常在基因或操纵子编码顺 序的上游，是 DNA 分子上可以与 RNApol 特异性结合并使之开始转录的部位， 但启动子本身不被转录。 ?
增强子 /沉默子－为真核 ?基因组（包括真核病毒基因组）中的一种具有增强邻近 基因转录过程的调控顺序。 其作用与增强子所在的位置或方向无关。 即在所调控 基因上游或下游均可发挥作用。 /沉默子－负增强子，负调控序列。
核糖体结合位点/起始密码/SD序列（Rbs/AGU/SDs）: mRNA有核糖体的两个 结合位点，对于原核而言是 AUG （起始密码）和SD序列。？ 转录终止顺序（终止子） /翻译终止密码子:结构基因的最后一个外显子中有一 个AATAAA的保守序列，此位点down — stream有一段GT或T富丰区，这2 部分共同构成poly（A）加尾信号。结构基因的最后一个外显子中有一个 AATAAA 的保守序列，此位点down— stream有一段GT或T富丰区，这2部分共同构成 poly （A）加尾信号。？
回答有人之前提出的一个问题: 为什么质粒图谱上有的箭头顺时针有的箭头逆时 针，那其实是代表两条DNA链，即质粒是环状双链DNA，它的启动子等在其中 一条链上，而它的抗性基因在另一条链上 .
三、介绍一下关于载体的知识（虽然课本上都有写）
什么是载体 即要把一个有用的基因 （目的基因 ——研究或应用基