实验4高效液相色谱法测定茶叶中咖啡因含量.doc

实验4高效液相色谱法测定茶叶中咖啡因含量.doc1
高效液相色谱法测定茶叶中的咖啡因
高效液相色谱法测定茶叶中咖啡因含量
一目的要求：
1学习高效液相色谱定性和定量分析的方法；
2熟悉高效液相色谱仪的结构；
3熟悉高效液相色谱分析操作和条件的设置。
二实验原理：
茶叶中咖啡因的含量是衡量茶叶质量的重要指标之一，也具有多种药理活性，咖啡因又 名咖啡碱，属甲基黄嘌呤化合物，具有提神醒脑等刺激中枢神经的作用。对于茶叶中咖啡因 含量测定的常用方法有紫外分光光谱法，高效液相色谱法。茶叶中的成分较多，色谱法具有 分离和检测双重功能，用色谱法更好。目前茶叶中咖啡因含量的测定采用反相高效液相色谱 法较普遍。本实验采用紫外检测器，水提取茶叶中的咖啡碱，用 $卫的滤膜过滤，用
%H3PO4: CH30H（80:20）流动相，检测波长276nm,用咖啡因对照品的保留时间进行定性， 用外标法定量。
三试剂和仪器：
LC-2010AHT高效液相色谱仪（日本岛津），自动进样系统和紫外检测器；KQ3200E型超 声波清洗器；」m的水系滤膜和有机滤膜；TDL-40B离心机。100mL的容量瓶。
对照品工作溶液为：咖啡碱标样，乙醇；磷酸；纯净水；甲醇；茶叶样品
四茶叶样品的处理
准确称取茶叶样品1 g（ g）于100 mL容量瓶，加入约70mL纯净水，在超声波中 超声20min，平行3份，定容至100mL。」m的水系滤膜抽滤，取续滤液与比色管（或者 用5000转/min以上的离心机离心15min，取上清液），待用。
五 色谱条件（实验时自己记录）
色谱柱：
流动相体系：%磷酸-甲醇（体积比为80 : 20）（注意：在做样品时用梯度洗涤，咖 啡因出峰后用100% CH3OH冲洗7-8min的柱子，%磷酸理醇（体积比为 80 : 20） 平衡7-8min柱子才能进下一样品）
流速： mL/min 柱温： OC
进样量：5山 检测波长：276 nm
六咖啡因标准曲线绘制和样品测定
用相同浓度的咖啡碱标准溶液，按照下表 1中的不同体积进样。
表1进样体积和峰面积
进样体积（丄） 咖啡碱进样质量 （Q） 咖啡碱峰面积A

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高效液相色谱法测定茶叶中的咖啡因
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