挥发性脂肪酸VFA测定步骤与方法.doc

挥发性脂肪酸VFA测定步骤与方法.doc挥发性脂肪酸的测定
一、 GC ( Gas chromatograph )工作条件
仪器：GC-14B型气相色谱仪(日本岛津公司)
毛细柱：NUKOLTM Capillary Column ( Supelco ) ； Column
-07B
30mX 阿 film thickness
气相色谱仪参数：色谱柱采用毛细吸管柱，柱温130 C,汽化温度
180 C,采用氢离子火焰检测器，检测温度180 C,载气为氮气， 压力为60 KPa，氢气压力为50 KPa，氧 气压力50 KPa，灵敏度(档) 为101，
二、 样品制备
1 .试剂制备
配制25%w/v 的偏磷酸溶液，将25g偏磷酸溶在100mL双蒸 水中
巴豆酸的配制， 酸，定容到100mL。 (可先用80 ml双蒸水，加热溶解偏磷酸， 然后定容至100 ml )
(3 )标准样品， g、 g、 g、、， 分别溶于双蒸水中，再各自定容至100 mL。
样品制备
(1)发酵液取(或过滤瘤胃液)VFA测定1ml样品到离心管中，再 ml的偏磷酸巴豆酸混合溶液，-20 C冰箱保存过夜，解 冻后12000rpm 离心5min，取上清液保存，测 定前再12000rpm 离 心5mi n( ^m针式滤器， 微量进样器瞬时注入色谱仪， — ^L。
⑵ 食糜及粪样VFA测定 取1g置于离心管中，加入5 — 10倍的双 蒸水，混合均匀。取1mL上清夜， 。其 它步骤同上。
保留时间的确定
与样品处理相同，在1 豆酸的混合样，上样测出乙酸、丙酸、丁酸、异丁酸、戊酸和异戊 酸的保留时间。
有机酸浓度的计算
通过标准样品和内标巴豆酸各自的（或浓度）和峰面积可以计 算出乙酸、丙酸及丁酸等有机酸的相对校正因子，然后根据乙酸、
丙酸及丁酸的重量（或浓度）与其峰面积成正比计算出各个样品中 的乙酸、丙酸及丁酸浓度。
（样品某酸峰面积值X巴豆酸标样峰面积X某酸标样浓度）
某酸浓度（mM）=
（样品中巴豆酸面积值X标样某酸峰面积）
挥发酸标样的质量和换算的浓度
标样浓度
质量 /g/100mL
分子量
浓度/mM
巴豆酸 n



乙酸



丙酸



丁酸



异丁酸 n



戊酸



异戊酸



有机酸重现率
将某有机酸（如乙酸）连续上样几次，测定其峰面积值，利用 某酸峰面积值和内标峰面积值计算其重现率。
乙酸重现率变异系数： ±
丙酸重现率