阿萨伊油中β―谷甾醇及总甾醇含量测定和抗氧化活性研究.docx

阿萨伊油中β―谷甾醇及总甾醇含量测定和抗氧化活性研究.docx阿萨伊油中3—谷宙醇及总宙醇含量测定和抗氧化活
性研究
［摘要］建立阿萨伊油中带醇类成分的含量测定方法，并对阿萨伊油 的抗氧化活性进行评价。采用高效液相色谱法建立了阿萨伊油中B -谷带 醇、总带醇(B-谷陪醇、豆陪醇之和，以B-谷陪醇计. 1谷陪醇、总陪醇的含量测定
2. 1. 1色谱条件和系统适用性试验Purosper STAR LP C18色谱柱(4. 6 mmX250 mm, 5 u m);流动相乙腊(A)-异丙醇(B)梯度洗脱，0〜25 min, 30% B; 25〜26 min, 30%〜90% B; 26〜40 min, 90% B。流速 1 mL?min-l: 柱温室温；蒸发光散射检测器漂移管温度70 °C、雾化器流速2. 0 L?min-1;
进样量10 UL。在上述色谱条件下，各成分峰之间分离度良好，理论板数 按B-谷留醇计算应不低于5 OOOo空白溶剂无干扰。色谱图见图1。
B-谷街醇;。
图1阿萨伊油(A)和对照品(B)的HPLC-ELSD图
Fig. 1 HPLC-ELSD chromatograms of sample solution (A) and standard solution (B)
，精密称定，加流动相 溶解并稀释制成每1 mL含B -谷陪醇、豆陪醇均约为0. 25 mg的混合对照 品溶液。 2. g,置于 100 mL具塞锥形瓶中，加入1%硫酸乙醇溶液30 mL,摇匀，85 °C水浴回 流3 h。放冷至室温，加入2 mol?L-l氢氧化钠乙醇溶液30 mL,摇匀， 85 ^水浴回流2 ho放冷至室温，加入饱和氯化钠水溶液30 mL,摇匀， 转移至分液漏斗中，石油醍萃取3次，每次40 mLo合并石油醍层，水洗 至中性。石油醍层减压回收溶剂至干，加流动相溶解并定容至5 mL量瓶。 um微孔滤膜过滤，取续滤液即得。
, 4, 5, 6, 8, 10, 15, 20, 25 UL注入液相色谱仪，以In (进样量)为横坐标，In (峰面 积)为纵坐标，绘制标准曲线。回归方程为Y=l. 639X+0. 702 7(r=0. 999 2)。 结果表明B -谷带醇在0. 766-6. 38 ug线性关系良好。
、定量限分别精密吸取对照品溶液一定体积进样分析, 确定B- ug(S/N=3), ug(S/N=10)o
2. 1. 6精密度试验 精密吸取同一供试品溶液10 u L,连续进样6次,
记录色谱峰的峰面积，结果B-谷缶醇、总留醇峰面积的RSD分别为2. 8%, %,表明仪器精密度良好。
，分别在0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 8, 10, 12, 24 h分别进样依法测定其峰面积。B-谷陪醇、总带醇峰面积 的RSD分别为2. 3%, %,表明供试品溶液稳定性良好。
2. 1. 8重复性试验 取同一批(批次1)阿萨伊油样品6份，按供试品 方法制备，分别依法测定。B-谷带醇、总带醇含量的RSD分别为2. 8%, 2. 9%,表明本方法重复性良好。
2. 1. 9加样回收试验 精密称取已知含量的样品(批次1)约0. 5 g共 6份，分别加入同一浓度的对照品溶液( g?L-l) 1 mL,按供试品溶 液制备方法制备，依法测定，加样回收率符合要求，见表1。
取3批阿萨伊冻干粉制备阿萨伊油，按供试品方 法制备，分别依法测定。阿萨伊油中B-?gT (0. 185%), mg?g-l (0. 193%)o阿萨伊冻干粉中 B- mg?g-l (%),总带醇质量分数(以 B-谷缶醇计)为 mg?g-l (%)。
(TOSC)测定阿萨伊油的抗氧化活性
2. 2. 1 TOSC测定 待测样品TOSC的计算公式为T0SC=100-( f AS / f AC) XIOOo式中/AS , /AC分别为样品(有外加抗氧化剂)和对照(无 外加抗氧化剂)反应系统中产生的乙烯量(以峰面积表示)。当样品无抗 氧化能力时，样品和对照中乙烯的峰面积相同，fAS/fAC =1, TOSC=0; 相反，当样品抗氧化
表1。-谷船醇加样回收率试验
Table 1 Recovery results of B -sitosterol
测定成分取样量/g样品中含量/mg加入量/mg测得量/