对生蒴蛤谷胱甘肽转移酶的光谱研究.pdf

Vol. 24 高 等 学 校 化 学 学 报 　 No. 8　
2 0 0 3 年 8 月 　　 　　　　　CHEMICAL 功能提供了依据, 为利用谱学手段来研究蛋白质结构和酶学性质提供了一种方法.
1　实验部分
1. 1　材料和试剂
对生蒴蛤购于北京大钟寺批发市场, Sepharo se-4B 和蛋白质标准分子量为 Pharmacia 公司产品,
还原型谷胱甘肽( GSH) 、利尿酸( ECA ) 、对硝基苯乙酸( 4-PNA) 、7-氯-4 硝基苯( NBD-Cl) 购于 Sig ma
公司, 二硫苏糖醇( DTT ) 为 Pr omega 公司产品, 其它试剂均为国产或进口分析纯产品.
1. 2　酶的纯化
参照 M annervik 等[ 14] 的方法制备 GSH 亲和层析柱.
取对生蒴蛤的肝肠组织, 用生理盐水洗净, 然后按照质量体积比 1∶4 加入, 经 4 ℃预冷的缓冲液
A( 10 mm ol/ L Tris-HCl, 1 mm ol/ L EDTA, 3 mmo l/ L DT T , pH 8. 0) 匀浆, 将匀浆液 12 000 g 和
收稿日期: 2002-04-28.
基金项目: 国家海洋“八六三”计划( 批准号: 819-04-02) 资助.
联系人简介: 周先碗( 1949 年出生) , 男, 教授, 博士生导师, 从事蛋白质结构与功能研究. E-mail: xw zhou@ pk u. edu . cn
付学奇( 1960 年出生) , 男, 博士, 教授, 从事细胞信号传导与药物筛选研究. E-mail: fxq@ mail. jlu. edu . cnN o. 8 杨海灵等: 对生蒴蛤谷胱甘肽转移酶的光谱研究 　　14　73
100 000 g 分 别 进行 离 心 得到 上 清 液. 用 缓 冲液 A 将上 清 液 稀释 1 倍, 用 缓 冲 液 A 平 衡 GSH-
Sephar ose-4B 亲和柱, 上样, 以缓冲液 B( 10 mmo l/ L T ris-HCl, 1 mm ol/ L EDT A, 3 mmol/ L DTT ,
0. 7 m ol/ L NaCl, pH = 8. 0) 平 衡至 基线, 用 缓冲 液 C ( 10 m mol/ L T ris-HCl, 1 m mol/ L EDT A,
3 mmo l/ L DTT , 10 m mol/ L GSH , pH 8. 0) 洗脱, 收集洗脱峰, 获得粗酶液.
使用 Phar macia 公司的 pepRPC C8 反向柱分离粗酶液. 平衡液 A : 质量分数为 0. 1%的