细胞培养用液的配制.docx

3、细胞培养用液的配制
【实验u的】
.掌握DMEMg养基、胰酶的配制
.学习针头滤器的使用方法
【实验原理】

气体环境
气体是细胞生存的必需条件之一,所需气体主要有氧气和二氧化碳。氧气参与三竣酸循环,3、细胞培养用液的配制
【实验u的】
.掌握DMEMg养基、胰酶的配制
.学习针头滤器的使用方法
【实验原理】

气体环境
气体是细胞生存的必需条件之一,所需气体主要有氧气和二氧化碳。氧气参与三竣酸循环,产
生能量和合成各种成分。二氧化碳主要维持培养基的pH,并作为碳源。一般用5%勺空气和5%C02
来提供动物细胞的气体生长环境。氧分压过大，不利于细胞生长。植物组织或细胞一般不需要额
外提供C02。
pH环境
细胞生长的pH环境为:-,不同细胞有所差异。一般细胞耐酸性比耐碱性大些。
C02对培养基pH的影响：C02是细胞的代谢产物，C02的释放必然会影响培养基的pHo
C02+H20H2C03H++HC03-
所以，培养基中要加一些缓冲剂，以保持pH的稳定，如NaHC03HEPE第
糖类
葡萄糖细胞的主要营养物质，为生命活动提供能量
糖类在生物体内的功能不仅仅是提供能量，与蛋口质和脂类共同构过程结构材料和生物活性
物质。
体外培养动物细胞时，儿乎所有的培养基中都以葡萄糖作为能源材料，根据不同细胞的代谢
特点,所加葡萄糖浓度有所不同。植物细胞培养一般以蔗糖作为能源物质。
氨基酸
所有细胞多需要以下12种氨基酸:精氨酸、胱氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、赖氨酸、蛋氨
酸、苏氨酸、色氨酸、组氨酸、酪氨酸、苯丙氨酸和^氨酸另外所有细胞都需要谷氨酰胺，其具
有特殊作用一促进氨基酸进入细胞膜,参与核酸合成，也是能源和碳源。
在细胞代谢中起调节作用，虽然所需甚微，但为机体正常代谢不可缺少。

培养基中除上述营养成分外，还需要促细胞生长因子，已知有许多激素具有促细胞增殖作
用。
血清是提供促细胞生长因子和其他细胞所需物质的来源。

1?天然培养基
常用的天然培养基有血清、血浆、水解乳蛋口和组织提取液（如鸡胚和牛胚浸液）、鼠尾胶
原等。
优点:营养成分丰富，培养效果好缺点:来源受限。
成分复杂，影响某些实验产物的提取和结果的分析易发生支原体污染
合成培养基
合成培养基是根据细胞生存所需物质的种类和数量，用人工方法模拟合成的。目前已设计出
许多种培养基，如DMEMRPMI-1640、TC19。MEIW。
合成培养基主要成分是氨基酸、维生素、碳水化合物、无机盐和其它一些辅助物质。优点:
标准化生产，组分和含量相对固定。成本低
缺点:缺少某些成分，不能完全满足体外细胞生长需要。人工合成培养基只能维持细胞生
存，要想使细胞生长和繁殖，还需补充一定量的天然培养基（如血清）O
培养基的主要种类（基础培养基）:
单纯的基础人工合成培养基只能维持细胞生存，要想使细胞生长和繁殖，还需补充一定量的
天然培养基
完全培养基的组成
基础培养基80%—95%
血清5%—20%

青、链霉素各100单位/毫升
有一定的保护
影响细胞骨
胰蛋白酶液浓
血清