酶联免疫吸附试验课件.ppt

关于酶联免疫吸附试验
现在学技术
定义：
将抗原-抗体反应与标记技术相结合，用放射性同位素、酶或荧光素等标记已知抗体或抗原，通过检测标记物，间接测定未知的抗原或抗体。
：
放射免被抗体 。将特异性抗体与固相载体联结，形成固相抗体。洗涤除去未结合的抗体及杂质。2） 加受检标本，保温反应。标本中的抗原与固相抗体结合，形成固相抗原抗体复合物。洗涤除去其他未结合物质。3） 加酶标抗体，保温反应。固相免疫复合物上的抗原与酶标抗体结合。彻底洗涤未结合的酶标抗体。此时固相载体上带有的酶量与标本中受检抗原的量相关。4） 加底物显色。固相上的酶催化底物成为有色产物。通过比色，测知标本中抗原的量。
现在学习的是第19页，共73页
（+）
1、已知抗体包
被载体
3、加酶标抗体
4、加酶作用的
底物显色
2、加待检抗原
4、加酶作用的
底物不显色
洗涤
洗涤
洗涤
洗涤
1、已知抗体包
被载体
2、加待检物
（无抗原）
3、加酶标抗体
（-）
Y
Y
Y
Y
Y
Y
E
Y
E
Y
E
Y
Y
Y
Y
Y
Y
Y
Y
Y
Y
E
Y
E
Y
E
Y
Y
Y
Y
Y
Y
Y
E
Y
E
Y
E
Y
Y
Y
Y
洗涤
洗涤
双抗体夹心法测抗原
现在学习的是第20页，共73页
双抗体夹心法中，应注意类风湿因子(RF)的干扰。如果待检标本中含有RF，可能产生假阳性结果。使用抗体的F(ab’)2或Fab片段作为酶标抗体可消除RF的干扰。
6．注意事项
现在学习的是第21页，共73页
（二）双位点一步法

用针对抗原分子上两个不同抗原决定簇的单克隆抗体分别作为固相抗体和酶标抗体，以检测抗原

检测抗原，较双抗体夹心法更为简便省时
现在学习的是第22页，共73页
E
E
E
底物
固相抗体
标本（含抗原）
酶标抗体

现在学习的是第23页，共73页

显色

和酶标抗体
洗涤

被载体
Y
Y
Y
Y
E
Y
Y
E
Y
Y
Y
E
Y
Y
E
Y
Y
（+）

不显色
（无抗
原）和酶标抗体
洗涤

被载体
Y
Y
Y
Y
E
Y
Y
E
Y
Y
（-）
Y
Y
Y
洗涤
洗涤

现在学习的是第24页，共73页
如果待检标本中抗原浓度过高， 容易形成“钩状效应（hook effect）”。钩状效应严重时，可出现假阴性结果，必要时可将待检标本适当稀释后重新测定。
5．注意事项
现在学习的是第25页，共73页
（三）竞争法

受检抗原和酶标抗原竞争与固相抗体结合，因此结合于固相的酶标抗原量与受检抗原的量呈反比

可用于测定抗原或抗体
现在学习的是第26页，共73页
3、原理
现在学习的是第27页，共73页

显色

和酶标抗原
洗涤

被载体
Y
Y
Y
Y
Y
Y
（+）
E
Y
Y
Y
E

显色
（无抗
原）和酶标抗原
洗涤

被于载体表面
Y
Y
Y
Y
Y
Y
（-）
E
Y
Y
Y
E
E
E
E
E
E
E
洗涤
洗涤

现在学习的是第28页，共73页
5、特点：
用于抗原和半抗原的定量测定，也可对抗体进行测定。
酶标Ag（Ab）与样品或标准品中的非标记Ag（Ab）具有相同的与固相Ab(Ag)结合的能力。
反应体系中，固相Ab（Ag）和酶标Ag（Ab）是固定限量的，且前者的结合位点少于酶标记与非标记Ag（Ab）的分子数量和。
反应后，结合在固相载体上的酶标Ag（Ab）的量（酶活性）与样品中非标记Ag（Ab）的浓度成反比。
现在学习的是第29页，共73页
（四）间接法

用固相抗原及酶标记抗抗体检