自己翻译的罗氏tunel检测细胞凋亡试剂盒说明书.doc

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罗氏tunel检测细胞凋亡试剂盒说明书
注意：Label溶液含有甲次砷酸盐和二氯化钴，严禁吸入和食入。
反应悬浮物收集于密闭、不易碎、有明确标识的容器中，按有毒废物处理。
试剂盒组成:
小瓶/盖子
标签
内容物
1蓝色
鉴定细胞凋亡的类型和阶段
Function-tested 功能检杳
对于大量的批号来说，每一批号均进行了功能检测
步骤和所需材料:
1流程图：
2样品准备
黏附细胞、细胞涂片和细胞离心涂片
需准备的其他试剂： Washing buffer :磷酸盐缓冲液（PBS）
Blocking buffer封闭溶液：甲醇稀释的 3% H2O2
Fixation solution固定溶液：PBS配制的4%多聚甲醛，ph，新鲜配制
Permeabilisation solution 渗透液：%Triton 1 X-100 溶于 %柠檬酸钠溶液 中，新鲜配制
步骤：下表描述了细胞固定、内源性过氧化物酶封闭和细胞渗透过程。
注意：固定和渗透另外两个细胞样本用于银杏和阳性对照
步骤
操作
1
用新鲜配制的固定液固定风干的细胞样本，
1h, 15-25 C
2
用PBS冲洗玻片
3
用封闭液孵育，10min ,15-25 C
4
用PBS冲洗玻片
5
用渗透液孵育，2min，置于冰上2-8 C
6
按操作
组织部分
福尔马林-包埋组织
福尔马林包埋组织的预处理：可按 4种不同的方式预处理。如用蛋白酶 K，不含核酸酶，浓
度、孵育时间和温度应按组织类型优化
注意：只用罗氏应用科学的蛋白酶 K，因其经检测不含核酸酶， 核酸酶可导致假阳性。
另外3中替代方法在下表中描述（step 2）
需准备的其他试剂：二甲苯和乙醇（浓度： 95%，90%，80%，70%，溶于双蒸水中）
Washing buffer: PBS
蛋白酶K，不含核酸酶，工作浓度：［10-20ug/ml，溶于10mM Tris/HCL 中，］
替代处理方案
※渗透溶液：％Triton1）X-100，溶于%柠檬酸钠的，新鲜配制
※胃蛋白酶*（%%，溶于盐酸中，ph2）或胰蛋白酶*， HCL，不含核 酸酶
，ph6，微波照射
步骤：下表描述了用蛋白酶 K （不含核酸酶）和 3中替代方法预处理福尔马林 -包埋组织的
方法
注意：加入额外的组织用于阴性和阳性对照
步骤
操作
1
按照标准操作脱蜡和再水化组织（• 60 C加热，二甲苯浸洗，一系列梯度酒精和双蒸 水再水化
2
用蛋白酶K工作液于21-37 C中孵育15-30min
替代方法
操作
1•渗透液
孵育8 min

37 C孵育 15-60min
3•微波射线
将玻片置于含有 200ml M柠檬酸盐缓冲液，的塑 料容器中
350 W微波放射 5 min
3
用PBS冲洗两次
4
按操作
冰冻组织处理（略）
3标记草案
开始之前
准备TUNEL反应混合液：每一对管子（小瓶1 :酶溶液，小瓶2：标记溶液）足以用于50ul
反应体系的10张片子，和2个50ul标记溶液的阴性对照。
注意：TUNEL反应混合液应于用前临时配制，不