溶菌酶实验-实验报告-第七组.docx

溶菌酶实验-实验报告-第七组
溶菌酶的提取和系列性质测定
实验报告
学院： 生物科学与工程学院
班级：
姓名：
学号： 0试剂：考马斯亮蓝G-250 100mg溶于50mL 95%乙醇中，加入100mL 85%磷酸，用蒸馏水稀释至1000mL，滤纸过滤；公用。
(11) 标准蛋白质溶液： ，；公用。
(12) 底物溶液Ⅱ：300mg溶壁微球菌干粉溶于100ml测活缓冲液中；（生物技术班不用配制）。
(13) 10mol/L 脲，测活缓冲液配制；（生物技术班不用配制）。
(14) 30%胶贮液：，；
(15) Tris-HCl pH ；购买，不用配。
(16) Tris-HCl pH ；购买，不用配。
(17) 10%（W/V）过硫酸铵；现配。
(18) SDS电泳缓冲液：25mmol/L Tris， Gly，%（W/V）SDS；
(19) 10%（W/V）SDS；公用。
(20) 染色液：-250，42mL工业酒精，10mL冰醋酸，加蒸馏水至50mL；
(21) 脱色液：5mL冰醋酸，45mL工业酒精，50mL蒸馏水；100ml
(22) 保存液：7%冰醋酸；现配。
(23) 2×上样缓冲液：购买，不用配。
Tris-HCl pH 2mL
甘油 2mL
20%SDS 2mL
%溴酚蓝
2-β-巯基乙醇
蒸馏水
三：实验步骤
1 酶的提取
（一）样品的制备：
新鲜鸡蛋四个，破蛋壳取出蛋清，（pH ），搅拌均匀，（NaOH调pH），然后用八层纱布过滤，留取上清液，量取体积并记录，（定为Ⅰ步骤样品）-20℃冻存备用。
（二）阳离子交换层析
： NaOH浸泡30min，水洗至中性，，水洗至中性。
：，。
：在已平衡好的阳离子交换树脂中加入蛋清样品，搅拌吸附1h（玻璃棒搅拌）。
：倒去其余上清液，树脂用100mL ，。
：将树脂搅拌均匀装入离子交换柱，再用300mL NaCl
，。（装柱前，先检查层析柱是否干净，保证所有接头密闭、管道通畅；装柱时，流速不超过3mL/min，全过程绝对不能出现流干现象）。
： ，，合并光吸收高峰管，量取体积并记录，，-20℃冻存备用（定为Ⅱ步骤样品）。
（三）硫酸铵沉淀
每100mL上清液中缓慢加入35g硫酸铵固体，溶解后静置30min，10000rpm离心10min， NaCl的磷酸盐缓冲液，，，-20℃冻存备用（定为Ⅲ步骤样品）。
四 注意事项
，层析柱要达到平衡。
。
（四）实验数据
图1 酶提取仪器稳定图
图2 酶提取平衡图
图三 酶提取洗脱图
2酶的纯化
分子筛层析
(1)溶胀：取葡聚糖凝胶G-50 3g，加60mL蒸馏水沸水浴中煮沸2h，充分溶胀后的凝胶以倾斜法除去表面悬浮的小颗粒，如此反复洗涤2～3次，