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溶菌酶实验-实验报告-第七组
二、实验原理：
1蛋白质提取分离技术
以蛋白质和结构与功能为基础，从分子水平上认识生命现象，已经成为现代生物学发展的主要方向，研究蛋白质，首先1）考马斯亮蓝G-250；（12）95%乙醇；（13）85%磷酸；（14）牛血清清蛋白(BSA)；（15）脲；（16）丙烯酰胺（Acr）；（17）甲叉双丙烯酰胺（Bis）；（18）四甲基乙二胺（TEMED）；（19）甘氨酸(Gly)；（20）过硫酸铵（AP）；（21）考马斯亮蓝R-250；(22)三羟甲基氨基甲烷（Tris）；（23）2-β-巯基乙醇；（24）十二烷基磺酸钠（SDS）；（25）溴酚蓝；（26）冰醋酸；（27）
标准蛋白：SDS-低相对分子质量标准蛋白.
4、试剂配制
(1) ，；
(2) NaOH；200ml
(3) HCl；200ml
(4) 含50% 磷酸盐缓冲液，pH ；200ml，现配。
(5) NaCl的磷酸盐缓冲液，；现配。
(6) mol/L NaCl的磷酸盐缓冲液，；现配。
(7) mol/L NaCl的磷酸盐缓冲液，；现配。
(8) 测活缓冲液：含30mmol/L ，；现配。
(9) 底物溶液Ⅰ：40mg溶壁微球菌干粉溶于100mL测活缓冲液中；现配，公用。
(10) 考马斯亮蓝G-250试剂：考马斯亮蓝G-250 100mg溶于50mL 95%乙醇中，加入100mL 85%磷酸，用蒸馏水稀释至1000mL，滤纸过滤；公用。
(11) 标准蛋白质溶液： ，；公用。
(12) 底物溶液Ⅱ：300mg溶壁微球菌干粉溶于100ml测活缓冲液中；（生物技术班不用配制）。
(13) 10mol/L 脲，测活缓冲液配制；（生物技术班不用配制）。
(14) 30%胶贮液：，；
(15) Tris-HCl pH ；购买，不用配。
(16) Tris-HCl pH ；购买，不用配。
(17) 10%（W/V）过硫酸铵；现配。
(18) SDS电泳缓冲液：25mmol/L Tris， Gly，%（W/V）SDS；
(19) 10%（W/V）SDS；公用。
(20) 染色液：-250，42mL工业酒精，10mL冰醋酸，加蒸馏水至50mL；
(21) 脱色液：5mL冰醋酸，45mL工业酒精，50mL蒸馏水；100ml
(22) 保存液：7%冰醋酸；现配。
(23) 2×上样缓冲液：购买，不用配。
Tris-HCl pH 2mL
甘油 2mL
20%SDS 2mL
%溴酚蓝
2-β-巯基乙醇
蒸馏水
三：实验步骤
1 酶的提取
（一）样品的制备：
新鲜鸡蛋四个，破蛋壳取出蛋清，（pH ），搅拌均匀，（NaOH调pH），然后用八层纱布过滤，留取上清液，量取体积并记录，（定为Ⅰ步骤样品）-20℃冻存备用。
（二）阳离子交换层析
： NaOH浸泡30min，水洗至中性，，水洗至中性。
：，。
：在已平衡好的阳离子交换树脂中加入蛋清样品，搅拌吸附1h（玻璃棒搅拌）。
：倒去其余上清液，树脂用100mL ，。
：将树脂搅拌均匀装入离子交换柱，再用300mL