猕猴桃的研究.ppt

猕猴桃的研究
遗传转化的方法:根癌农杆菌或发根农杆菌介导法、病毒介导法 、电激法、电注射法 、LB法 、动态导入法、基因枪法、显微注射法、超声波法、花粉管通道法 等
猕猴桃转化的常用方法：农杆菌介导转化法、基因枪法 ，这两种方法猕猴桃的研究
遗传转化的方法:根癌农杆菌或发根农杆菌介导法、病毒介导法 、电激法、电注射法 、LB法 、动态导入法、基因枪法、显微注射法、超声波法、花粉管通道法 等
猕猴桃转化的常用方法：农杆菌介导转化法、基因枪法 ，这两种方法是根据猕猴桃在其转化过程中需要通过组织培养再生植株常用的两种方法。
农杆菌介导转化法的原理：
　　农杆菌是普遍存在于土壤中的一种革兰氏阴性细菌，它能在自然条件下趋化性地感染大多数双子叶植物的受伤部位，并诱导产生冠瘿瘤或发状根。根癌农杆菌和发根农杆菌中细胞中分别含有Ti质粒和Ri质粒，其上有一段T-DNA，农杆菌通过侵染植物伤口进入细胞后，可将T-DNA插入到植物基因组中。因此，农杆菌是一种天然的植物遗传转化体系。人们将目的基因插入到经过改造的T-DNA区，借助农杆菌的感染实现外源基因向植物 细胞的转移与整合，然后通过细胞和组织培养技术，再生出转基因植株。
　　农杆菌介导法起初只被用于双子叶植物中，自从技术瓶颈被打破之后，农杆菌介导转化在单子叶植物中也得到了广泛应用，其中水稻已经被当作模式植物进行研究。
基因枪法转化的原理：
Gene gun:（基因枪）The most extraordinary system of transferring DNA into plant cells involves minute metal beads being shot into plant cells. 用火药爆炸或者高压气体加速将包裹了DNA的球状金粉或者钨粉颗粒直接送入完整的植物组织或者细胞中，这一加速设备称为基因枪。
基因枪法是一种全新的基因导入仪技术，它把遗传物质或其他物质附着于高速微弹直接射入细胞、组织和细胞器，是目前国际上最先进的基因导入技术。气体基因枪以压缩气体（氦或氮）转换成的气体冲击波为动力，使气体基因枪枪产生一种“冷”的气体冲击波进入轰击室，因此可免遭由“热”气体冲击波引起的细胞损伤。气体基因枪可在广泛的细胞型中得到瞬时的、稳定的和高效率的转化作用。气体基因枪有一个产生冲击波的特殊结构，-10MPa，具有相应不同的可破裂膜，将包覆DNA的粒子穿越，射入在轰击室底部的靶细胞中（最大靶直径50mm）。基因枪适用于动植物、细胞培养物、胚胎、细菌及小型动物的转基因。具有快速、简便、安全、高效的特点、中科院遗传所、北京大学、浙江大学、西北农林科技大学等有关单位均采用该设备。
基因枪适范围：动植物、细胞培养物、胚胎、细菌及小型动物的转基因。
基因枪使用的的优点：具有快速、简便、安全、高效的特点。
影响猕猴桃遗传转化效率的因素 ：转化方法 、受体系统、 筛选标记基因 、农杆菌菌株
转化方法 :农杆菌介导的叶盘法是目前猕猴桃基因及其他木本植物改良中最成熟、最高效的方法。但农杆菌介导法的转化过程中要合理掌握菌液的浓度、侵染和共培养的时间等，且需要解决培养过程中容易出现细菌大量增殖而导致外植体不能继续生长的问题。基因枪转化效率较低，但常可在轰击叶片上形成很多微小创伤而有利于农杆菌的侵染，因此，将基因枪转化和叶盘法转化相结合，可大大提高基因转化效率 。
受体系统:作为受体系统要求具有良好的再生能力和充足的外植体来源。
农杆菌菌株:不同农杆菌菌株、甚至同一菌株在不同培养条件下侵染能力有明显差异，也就是说农杆菌菌株本身的因素对其侵染能力有很大影响。这些因素包括农杆菌的趋向能力；农杆菌表面存在不适合的成分阻止农杆菌对植物细胞的附着；农杆菌外膜的信号受体蛋白不能有效地识别植物细胞分泌的诱导分子等。
筛选标记基因:在质粒载体构建中往往插入了标记基因，它能编码正常植物细胞中不存在的酶，并能在转化体中充分表达而易于检测。对于不同植物、同一植物不同品种所实用的筛选标记基因不同，筛选标记基因和筛选剂的种类和浓度的选择正确与否直接影响转化的成功与否。
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