环境中微生物分离及检测实验.docx

环境中微生物的检测和分离纯化生 32程雨婧 2013012406 组别:周五班同组成员:谢丰实验时间 2015 年 4月 10日一、实验目的 1. 熟悉常用微生物培养基配制与灭菌的方法及原理。 2. 学习并掌握各种无菌操作技术,并用此技术进行微生物的分离,纯化。 3. 用平板划线法和稀释法分离微生物。 4. 认识微生物存在的普遍性,理解无菌操作的重要性。二、实验原理(一) 微生物的分离与纯化微生物聚集最多的地方是土壤, 土壤是各种微生物生长繁殖的大本营。空气里悬浮着无数细小的尘埃和水滴,它们是微生物在空气中的藏身之地。各种水域中也有无数的微生物。居民区附近的河水和浅井水容易受到各种污染,水中的微生物就比较多。大湖和海水中,微生物较少。从人和动植物的表皮到人和动物的消化道,也都经常生活着大量的微生物。从混杂的微生物群体中获得只含有某一种或某一株微生物的过程称为微生物的分离与纯化。常用的是平板分离法。为了获得某种微生物的纯培养,一般是根据该微生物对雪养、酸碱度、浓度和氧等条件要求不同, 而供给它适宜的培养条件, 或加入某些抑制剂抑制其他菌生长而利于此菌生长的环境, 从而淘汰其他一些不需要的微生物. 再用稀释涂布平板法或稀释后平板划线分离,纯化该微生物,直至得到纯菌株。(一) 微生物的分离与纯化平板菌落计数法是将待测样品经适当稀释, 使其中的微生物充分分散成单个细胞, 取一定量的稀释样液接种到平板上,经过培养,由每个单细胞生长繁殖而形成肉眼可见的菌落, 即一个单菌落应代表原样品中的一个单细胞。统计菌落数, 根据其稀释倍数和取样接种量即可换算出样品含菌数。三、实验材料,仪器和用具 1. 仪器和用具仪器:取液器( 5000ul 、 1000ul 、 100ul 各一支) ;培养箱。用具:接种环;酒精灯;平板;涂布棒;培养皿;无菌 100ul, 1000ul 枪头;记号笔。 2. 材料和试剂菌源: 土样( 浓度 10 -2), 大肠杆菌( 液体), 粘质赛氏杆菌( 固体平板), 枯草杆菌(液体), 金黄色葡萄球菌( 液体), 身边环境。培养基: 牛肉膏蛋白胨培养基每人 10个,小组 20 个。试剂: % 无菌生理盐水四、实验步骤 1. 从土壤中分离微生物 1) 采土样选择肥沃土壤, 去表层土,挖 5~20cm 深土壤, 装入烧杯, 带回实验室。 2) 制备土壤稀释液 a) 称取土样 , 放入盛 99ml 无菌水并带有玻璃珠的三角瓶中, 用手振荡 5min 使土壤均匀分散成为土壤悬液( 10 -2)。(以上步骤已由助教完成) b)用 100ul 的无菌吸头从中吸取 土壤悬液, 注入事先分装有 无菌水的试管中,吹吸 3 次,摇匀( 10 -3) 。类推制得 10 -4、 10 -5、 10 -6 的土壤悬液。 3) 涂布用无菌枪头, 分别吸取 10 -4、 10 -5、 10 -6 浓度土壤稀释液 100ul , 均匀放入写好稀释度的培养基平板上,用无菌玻璃涂布棒涂匀,每个浓度做 3 个平板。 4) 培养将牛肉蛋白胨培养基平板倒置于 32℃温箱培养 24h ;统计所长出的菌落数。 5) 菌落计数有较大片菌苔生长时, 弃用, 以无片菌苔生长的平板计数; 若成片菌苔大小不到培养皿的一半, 其余一半分布均匀, 此半个平板计数后乘以