几种MIC的测定方法.docx

几种测定抗菌药物最低抑菌浓度（MIC）（试管）抗菌药物贮存液制备将抗菌肽稀释到无菌水中，制成1024ug/ml的原液，（，但要去掉前面5ml的过滤抗菌肽溶液）。抗菌药物贮存液光光度计测定ODaoo,与未接菌的比对，判断耐药（resistant,R）、敏感（susceptible,S）或中介（intermediate,I）。
微■肉汤稀释法（酶标板）。
MIC板制备无菌操作，将倍比稀释后不同浓度的抗菌药物溶液分别加到灭菌的96孔聚苯乙烯板中，第1至第11孔加药液，每孔10uI,药物浓度分别为1280、640、320、160、80、40、20、10、5、、°第12孔不加药作为生长对照，如果当时不使用，则冰冻干燥后密封，-20"C以下保存备用。
，经LB肉汤1:1000稀释后,向每孔中加90uI,密封后置37'C摇床孵育16~20h判断结果。此时，第1孔至第11孔药物浓度分别为128、64、32、16、8、4、2、1、、、»结果判断以在小孔内完全抑制细菌生长的最低药物浓度为MIC（用酶标仪测得0D如）o当阳性对照孔（即不含抗菌肽）内细菌明显生长试验才有意义。当在微量肉汤稀释法出现单一的跳孔时，应记录抑制细菌生长的最高药物浓度。如出现多处跳孔，则不应报告结果，需重复试验。通常对革兰阴性杆菌而言，微量肉汤稀释法测得的MIC与常量肉汤稀释法测得的结果相同或低一个稀释度（1孔或2倍）°
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琼脂稀释法是将不同剂量的抗菌肽药物，加入融化并冷至50C左右的定量MH或LB琼脂中，制成含不同递减浓度抗菌药物的平板，接种受试菌，孵育后观察细菌生长情况，以抑制细菌生长的琼脂平板所含最低药物浓度为MIC。本法优点是可在一个平板上同时作多株菌MIC测定，结果可靠，易发现污染菌；缺点是制备含药琼脂平板费时费力。
，~。按照倍比稀释法，分别配制12800、6400、3200、1600、800、400、200、100、50、25、（如采用90S的抗菌肽，可以从3200ug/mL进行稀释）»，每个小三角瓶20ml液体培养基，，纱布封口后高压灭菌。灭菌后,冷却至并在50~55C（或至于该温度水浴中），每个三角瓶培养基中加入200uL的抗菌肽原液，并设置一个对照（不加入抗菌肽原液），则三角瓶中的培养基抗菌肽浓度为128、64、32、16、8、4、2、1、、、、Oug/mLo充分混匀倾倒灭菌平皿，琼脂厚度3~4mm。
，再1：10稀释,以微量取液器将制备好菌液（约C2uI）接种于琼脂平板表面，每点菌数约为10'CFU/mL,形成直径为5~8mm的菌斑。接种好后置37'C孵育16~20h,观察结果。
结果判断将平板置于暗