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纳洛酮影响大鼠心脏缺血后处理保护作用
刘光军胡烨文黄晓洁黄美霞
浙江大学医学院临床一系2班第五组
实验背景
20世纪80年代中期,Murry等提出心肌在经受多次短暂缺血再灌后,能减少心肌损伤,且已被很多实验证实。其中很多文献都证实阿片受体在其中的重要作用。
阿片受体的机制
阿片受体
G蛋白
PKC
KATP channels
HSP 70
Ca 2+overload
Ischemia-induced
Myocardial injury
纳洛酮
纳洛酮是一种特异性的阿片受体阻滞剂,但较大剂量时可对细胞直接作用,产生膜稳定性等效应,而与阿片受体无关。
实验目的
缺血后处理的保护作用(有 OR 无)

阿片受体参与保护作用?(用纳洛酮来验证)
实验分组
ischemia 30min reperfusion 30min
Control
Postcond
Nal
Nal+post
6s 6times
10 只/组
心脏灌流
心室动力学指标
压力换能器
±dP/dtmax LVEDP LVDP RPP
酶学指标
乳酸脱氢酶(LDH)的测定:
取缺血前,rep5min,rep10min,rep20min冠脉流出液
每样本两管
各50μL
基质250μL
37℃孵育3min
加H2O 50μL
37 ℃ 15min
加辅酶I 50μL
37 ℃ 15min
37 ℃孵育15min
2,4-二硝基苯肼250μL


静置3min 440nm
测吸光度
心肌线粒体渗透性转换孔道(MPTP)的开放程度
心脏剪碎匀浆
4 ℃ 1000 g离心 10 min
取上清液4 ℃
8000 g离心10 min
取沉淀重悬液重悬
再次4 ℃ 8 000 g
高速离心10 min
取沉淀重悬液中行考马斯亮兰蛋白测定法测定蛋白含量
肿胀液稀释至
g/L 蛋白
质浓度
200 mol/L 和1mmol/l的CaCl2分别作用于线粒体,连续观察在520 nm处线粒体吸光度的变化