SOD实验讲义.doc

本文以绿豆[13]为材料,采用垂直平板聚丙烯酰胺凝胶电泳技术,研究其 POD 和SOD 同工酶在不同超声波处理下的变化情况,探讨超声波对同工酶活力和组成的影响。 2 材料与仪器 材料绿豆种子(Mung bean seeds), 市场购得新鲜绿豆种子 500g 。 试剂 磷酸缓冲液: A) Na 2HPO 4: B) NaH 2PO 4: ? : 700ml A+300ml B------- 定容到 1L. ? 磷酸缓冲液 300ml + 蒸馏水 900ml-------- 配至 1200ml 磷酸缓冲液. ? 磷酸缓冲液: A) Na 2HPO 4: B) NaH 2PO 4: ? : 915ml A+85ml B------- 定容到 1L. ? 磷酸缓冲液 300ml + 蒸馏水 900 ml-------- 配至 1200ml 磷酸缓冲液. ? *10 -2 mol/L 磷酸缓冲液: A) Na 2HPO 4: B) NaH 2PO 4: ? : 915ml A+85ml B------- 定容到 1L. 磷酸缓冲液 200ml + 蒸馏水 920 ml-------- 配至 1120ml *10 -2mol/L 磷酸缓冲液. ? 磷酸缓冲液: A) Na 2HPO 4: B) NaH 2PO 4: ? : 135 mlA+165 mlB------- 定容到 300ml . ? 磷酸缓冲液 300ml + 蒸馏水 300ml-------- 配至 600ml 磷酸缓冲液. 考马斯亮蓝试剂:考马斯亮蓝 G―250 100mg 溶于 50ml95% 乙醇中,加入 100ml85% 磷酸,用蒸馏水稀释至 1000ml ,滤纸过滤。最终试剂中含 %(W/V) 考马斯亮蓝 G―250 ,%(W/V) 乙醇。 标准蛋白质溶液:结晶牛血清蛋白( BSA ) ,用 配制成 蛋白溶液。 连苯三酚试剂:连苯三酚 630 mg+100 ml10mmol/L HCl ( ml36% 的浓 HCl ,用蒸馏水配成 100 ml). 定容到 500ml. 50mmol/L Tric-HCl: A) mol/L Tris: -----1000 ml(储备液) B) mol/L HCL