纸层析法测定叶绿素.docx

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纸层析法测定叶绿素
纸层析法测定叶绿素
摘要：纸层析是用滤纸作为载体的一种色层分析法，其原理主要是利用混合物中各 This manuscript was revised on November 28, 2020
纸层析法测定叶绿素
纸层析法测定叶绿素
摘要：纸层析是用滤纸作为载体的一种色层分析法，其原理主要是利用混合物中各组分在；流动相和固定相的分配比（溶解度）的不同而使之分离。滤纸上吸附的水为固定相（滤纸纤维常能吸20%左右的水），有机溶剂如乙醇等为流动相，色素提取液为层析试样。把试样点在滤纸的滤液细线位置上，当流动相溶剂在滤纸的毛细管的作用下，连续不断地沿着滤纸前进通过滤液细线时，试样中各组份便随着流动相溶剂向前移动，并在流动相和固定相溶剂之间连续一次有一次的分配。结果分配比比较大的物质移动速度较快，移动距离较远；分配比较小的物质移动较慢，移动距离较近，试样中各组分分别聚集在滤纸的不同的位置上，从而达到分离。
关键词：纸层析，叶绿素，分离，速度
前言：初步掌握提取和分离叶绿体中色素的方法。叶绿体中有几种色素。胡萝卜素、叶黄素、叶绿素a、叶绿素b随层析液在滤纸上扩散速度不同，可以分出四条色素带。
材料和方法：
材料：
用具：剪刀一把、干燥的定性滤纸、50ml的烧杯及100ml的烧杯各3个、白纸3张、试管架一个、研钵一个、玻璃漏斗一个、尼龙布或纱布、毛细血管一只、药勺一个、10ml量筒一只，天平一只，试管3支、纸板一块、棉塞3个、培养皿3个、刻度尺、注射器一只、盖玻片 　　
试剂：丙酮、无水乙醇、层吸液（20份石油醚、2份丙酮、1份苯配置而成）、二氧化硅、碳酸钙、碳酸钠 　　
材料：新鲜的菠菜叶、青菜叶
方法和步骤：
1．提取绿色叶片中的色素 （1）取几片绿色的叶片，去掉叶柄和主脉，用天平称取 5g 叶片，剪碎，放 入研钵中。
（2）向研钵中放入少许二氧化硅和碳酸钙，进行充分的研磨。用量筒量取 5 ml 丙酮，倒入研钵中，迅速充分研磨。
（3） 将研磨液迅速倒入小玻璃漏斗中进行过滤。 将滤液收集到一个小试管中， 及时用棉塞将试管目塞紧。
2．制备滤纸条 取一块预先干燥处理过的定性滤纸，将滤纸剪成长 10 cm、宽 1cm 的滤纸 条，在距滤纸条一端 1cm 处用铅笔画一条细的横线。
3．画滤液细线、 用毛细吸管吸取少量滤液，沿铅笔线均匀地画出一条细而直的滤液细线。待 滤液于后，再画 2~3 次。
4．分离叶绿体中的色素 将 3 mL 层析液倒入烧杯中，将滤纸条（有滤液细线的一端朝下）略微料靠着 烧杯的内壁，轻轻地插入到层析液中，随后用培养皿盖盖上烧杯；（注意，不能让滤纸上的滤液细线触到层析液。纸层析法中所用的有机溶剂如丙酮等，一般有挥发性、并有一定毒性，使用时要注意密封层析，避免吸入过多有害挥发物。）
结果： 经过10—15分钟后，观察分离后色素带的分布。最上端橙黄色为胡萝卜素，其次黄色为叶黄素，再下面蓝绿色为叶绿素a，最后的黄绿色为叶绿素b。
讨论与分析：
分析：纸层析法依据极性相似相容原理，