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地高辛标记及检测试剂盒说明书(DOC).doc


文档分类:医学/心理学 | 页数:约21页 举报非法文档有奖
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仅仅研究于生命科学,不适合在诊断过程使用
只能在体外使用
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附加仪器与所需试剂
除了上表中列出的试剂外,你必须准备一些溶液。在下表中,你可以找到不同操作程
序需要准备的设备概要。
在每个操作程序的前面提供了详细的信息
操作程序 仪器设备 试剂
DIG-DNA 标记 水浴 灭菌的双蒸水
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标记效率的半定量 带正电荷的尼龙膜 *
测定
DNA 转移和固定
紫外光盒
或者商业化可用于紫外交联的其
他设备

杂交
尼龙膜,带正电荷 *
杂交袋 *
或者耐热的塑料袋或者滚筒瓶
注意 :当用地高辛杂交缓冲液工作
时,不要用开口的托盘

免疫检测
容器大小与滤器大小相适应
杂交袋 *
DNA 斑点的脱色和 大的托盘
重新标记探针 水浴

灭菌的 EDTA
地高辛洗涤和封组缓冲液组
合 *
TE 缓冲液
或者
洗涤缓冲液
马来酸缓冲液
检测缓冲液
TE 缓冲液
20×ssc
或者 10×ssc
地高辛洗涤和封组缓冲液组
合 *
TE 缓冲液
或者
洗涤缓冲液
马来酸缓冲液
检测缓冲液
TE 缓冲液
10×ssc
10%SDS
NaOH
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* 标记的产品可以从 Roche Applied Science 获得
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2 介绍
产品概况
实验原则
此试剂盒采用地高辛 ( DIG ),一种甾类半抗原, 去标记 DNA 探针从而通过酶免疫分析法用于杂交和后续的颜色检测( 1)
步骤 描述
DNA 标记 根据随机引物标记技术采用地高辛标记的高效引物获得了地高辛标记
的 DNA 探针。地高辛标记的高效引物是一种专门生产的产物混合物,
其中,含有地高辛 dUTP ,碱性标记(图 2)和所有的试剂,包括随机
引物标记所必须的酶,已预先优化的 5×浓度反应缓冲液
杂交 根据标准方法,地高辛标记的探针可以与固定在膜上的核酸杂交。采
用碱标记形式的地高辛 -11-dUTP 能够更加容易和有效的被洗脱下来,使固定在膜上的核酸可以与其他的地高辛标记探针再次杂交
免疫检测 杂交探针可以和抗地高辛的碱性磷酸酶结合物和 Fab 段进行免疫检测,
然后采用比色底物 NBT/BCIP 可以看到杂交结果。
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  • 上传人雨林书屋
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  • 时间2022-06-28