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医学硕士论文开题报告范例
医学硕士论文开题报告范例
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论文开题报告范例，欢迎参考~
一、立题依据(科学意义及国内外现状分析及参考文献)
恶性黑色-钙粘蛋白基因转染入黑色素瘤细胞后观察对其增殖和转移活
性的抑制情况，探索临床诊断和治疗黑色素瘤及其它肿瘤的方法!
三、研究方案(包括研究方法、技术路线、研究进度安排)
研究方法：
第一部分：正常表皮组织、痣细胞及黑色素瘤细胞中 T-
cadherin 表达情况
免疫组织化学和免疫细胞化学
：从正常人皮肤切取的痣组织，人黑色素瘤细胞株

(1)第一抗体：兔抗人 T-cadherin 抗体
(2)第二抗体：生物素标记羊抗兔 IgG
(3) “三抗” ：链亲和霉素标记 HRP

(1)冷冻切片的免疫染色程序
(2)活细胞的免疫染色程序

注意：为保证结果的可靠性应该同时设有对照
阳性对照(正常组织) ;
阴性对照(PBS 代替一抗)以证明抗体的特异性。
第二部分 T-cadherin 基因克隆和真核表达载体的构建
：
(1)组织和细胞
(2)菌株与质粒
(3)工具酶
(4)试剂
(5)仪器

(1)引物的设计
(2)总 RNA 的提取：异硫氰酸胍-酚-氯仿抽提一步法
(3)甲醛变性琼脂糖凝胶电泳分析其质量，观察所提 RNA 有无明
显降解;
(4)逆转录 RT 反响 ：为了证实 RT 反响的成功设管家基因
GAPDH 为内对照
(5)PCR 扩增 ：利用上下游引物，在 DNA 聚合酶下对目的片段
进展扩增，PCR 过程设 β-actin 为内对照
(6)PCR 产物的回收、纯化
(7)PCR 产物的克隆
(8)DNA 序列测定(9)真核重组表达质粒的构建
(10)阳性重组质粒的鉴定和筛选
(11)质粒的大量提取
(12)转染黑色素瘤细胞
第三部分：T-钙粘蛋白基因的真核表达及生物活性分析


(1)转染细胞的培养
(2) Western 印迹法检测转染后蛋白的表达
(3)流式细胞周期分析
(4)凋亡的检测
技术路线图：
研究进度安排：
—— 学习学位课程，查阅文献，完成课题设计
—— 根本完成实验研究工作
—— 完成实验补遗工作并 进展统计分析，撰写论文
—— 论文辩论
四、经费预算
试剂费用： 15000