麻风树果壳多糖的提取及抗氧化作用研究.doc

麻风树果壳多糖的提取及抗氧化作用研究摘要: 本实验研究了麻风树果壳多糖的最佳工艺提取工艺条件及抗氧化活性。采用麻风树果壳为原料, 以多糖得率为指标, 在单因素的基础上, 通过正交试验, 研究了提取温度、提取时间、料水比和乙醇浓度 4 个因素对麻风树果壳多糖得率的影响:并应用 AETC 法以及油脂抗氧化体系评价麻风树果壳多糖的抗氧化能力。结果表明提取温度对麻风树果壳多糖得率的影响程度达显著水平, 提取时间、料水比和乙醇体积分数对麻风树果壳多糖得率没有显著的影响。麻风树果壳多糖的最佳提取工艺条件为:温度 90℃,时间 , ,料液比 1:25 ,乙醇体积分数为 90 %,在此条件下麻风树果壳多糖得率为 %。麻风树果壳多糖具有较好的清除自由基的能力和一定的油脂抗氧化能力。关键词麻风树果壳多糖单因素试验正交试验提取工艺抗氧麻风树( Jat ropha curcas L.), 又名小桐子、膏桐、芙蓉树等,为大戟科( Euphorbiaceae )麻风树属落叶灌木,是一种抗旱耐瘠的速生树种,原产美洲热带,现广泛分布于全球热带和亚热带地区,是一种多用途植物, 常被用作油料、药物、饲料和染料等。在我国主要分布在云南、贵州、四川、广西、广东等省区的热带及干热河谷地区[1] 。据统计, 我国每年可产生麻风树果壳 5285 × 1012Kg ,传统的应用是将果壳作为普通燃料直接燃掉, 这种方法附加值不高, 经济效益差, 造成了极大的资源浪费。由于其中含有较高含量的硫分, 燃烧尾气还会对环境造成污染[2] 。因此我国潜在的可利用麻风树果壳资源十分丰富。麻风树果壳除了传统的拿来燃烧, 近年来更多的研究者倾向于果壳中活性物质(活性炭[3] 、抑菌活性物质[4] 等) 、生物柴油等方面的研究。但关于麻风树果壳的多糖提取及其抗氧化活性的研究鲜有报道。多糖是自然界中广泛存在机体中的生物聚合物。多糖是由十个以上乃至几十个单糖通过糖苷键相连形成的线性或支链的高聚物, 是所有生命有机体的重要组成部分,同维持生物机能密切相关。据相关研究[5,6] 表明,从天然产物中提取出来的多糖能参与生物体内细胞中的各种活动, 具有重要与特殊的生理活性。在提高人体免疫力和抗衰老[7,8] 、抗肿瘤、抗病毒[9,10] 、抗感染、抗凝血、抗氧化[11] 、等方面都表现出显著的药理作用与药用疗效[12] 。多糖的抗氧化研究[13] 表明,多糖的抗氧化性可能是多糖抗肿瘤、抗衰老、抗感染等其他活性的重要原理之一。因此,近年来提取植物中的多糖受到人们的关注[14,15] 。本实验采用传统的水侵醇沉的方法提取麻风树果壳多糖, 对其提取工艺条件进行优化,并对所提取多糖· OH 清除能力、 DPPH · 清除能力及还原能力进行研究[16] ,以其为麻风树果壳多糖的利用提供理论依据。 1 材料与方法 材料与试剂麻风树果:购于………….. 。将麻风树果壳和麻风树籽分离,并对果壳进行挑选,弃去腐烂及其他杂质,经热风干后粉碎,过 60 目筛,放置于干燥箱里备用。无水乙醇、丙酮、乙醚、葡萄糖、苯酚、浓硫酸、 Vc、邻二氮菲、 PB S 缓冲液( pH= )、过氧化氢、 DPPH 溶液、 PBS 缓冲液( pH= )、铁氰化钾、三氯乙酸、三氯化铁 仪器与设备电子恒温不锈钢水浴锅[ 上海宜昌仪器纱筛厂]; SHB~B95 型循环水式多用真空泵[郑州长城科工贸有限公司] ;粉碎机[ 绍兴市公路仪器设备有限公司]; TGL~16M 高速台式冷冻离心机[ 湖南湘仪实验室仪器开发有限公司]; DHG~9030 电子恒温鼓风干燥箱[ 上海贺德实验设备有限公司]; 721 可见分光光度计[ 上海菁华科技仪器有限公司]。 方法 麻风树果壳多糖提取参考已经报道的文献[17] ,准确称取过 60 目筛的麻风树果壳粉末,按一定的提取时间、提取温度、料液比侵提后, 冷却抽滤合并上清液; 上清液经加热浓缩到其体积基本不变后,加入一定量的乙醇进行醇沉, 4℃静置沉淀过夜,次日离心( 8000r/min ) ,将沉淀用少量的无水乙醇、丙酮、无水乙醚依次洗涤, 55℃真空干燥后即为麻风树果壳多糖。 多糖含量的测定(1 )标准曲线的绘制:采用苯酚- 硫酸法[18] :精密称取 20mg105 ℃干燥至恒重的标准葡萄糖,用蒸馏水定容至 100ml 。取一定量的标准葡萄糖稀释成浓度为 30、 60、 90、 120 、 150ug/ml 的溶液, 分别精密吸取 , 加入 50g/l 苯酚 混合后迅速加入 6ml 浓硫酸,然后混合均匀,放置于 30℃水浴 30min , 在波长为 490nm 处测定吸光值, 空白对照以蒸馏水代替糖溶液。以浓度(C) 为