抗菌药物敏感性试验(药敏试验).ppt

关于抗菌药物敏感性试验(药敏试验)
第1页，讲稿共118张，创作于星期一
目的
指导临床医生针对各类临床感染患者选择最佳抗菌药物
一定区域内积累对公共卫生有关的重要耐药的微生物流行病学资料
根据细菌对药物敏感谱进行菌种鉴定
或肉汤校正，
第18页，讲稿共118张，创作于星期一
从孵育16-24h 的非选择性琼脂培养基上用接种环挑取单个新鲜菌落，悬浮于生理盐水或肉汤中震荡混匀
与标准比浊管比浊，。
直接调制菌悬液法
生长法的简便替代法
第19页，讲稿共118张，创作于星期一
第20页，讲稿共118张，创作于星期一
用无菌棉拭子蘸取菌液
在管壁上方旋转挤压几次去掉过多水分
用拭子涂布整个M-H培养基表面，反复几次，每次将平板旋转60°
最后沿平皿周边绕两圈以保证涂布均匀
平板接种
第21页，讲稿共118张，创作于星期一
制备好的菌液必须在15min内使用
贴纸片前可将培养皿盖半开3-5min以使表面过多水分被吸收但不超过15min
第22页，讲稿共118张，创作于星期一
将接种好的平板敞开盖子倒置在室温下干燥3-5min 使平板上的水分被琼脂完全吸收。
用镊子取纸片一张贴在琼脂平板表面，轻压使其与琼脂完全接触。纸片中心间距≥24mm,纸片中心距平皿边缘≥15mm。直径90mm的平板最好贴6张。
加贴纸片
第23页，讲稿共118张，创作于星期一
15min内将平板倒置放温箱孵育。
纸片一旦贴下就不可再挪动位置，因纸片中的药物已扩散到琼脂中。
需要时应在适当的地方贴新纸片
注意
第24页，讲稿共118张，创作于星期一
必须用35℃孵箱（苛氧菌药敏平板应置于5% CO2 环境）
箱内平板最好单独摆放，不超过两个叠在一起，否则中间的平板因达不到孵箱温度而产生预扩散的作用。
孵育
第25页，讲稿共118张，创作于星期一
平板孵育规定时间（一般为18-24h）后读取结果，葡萄球菌和肠球菌必须孵育24h以检测苯唑西林和万古霉素的耐药性。
第26页，讲稿共118张，创作于星期一
孵育16-18h 后检查每一块平板
如果划线满意，接种物准确无误，抑菌圈应为正圆形，菌落应融合生长
出现明显单个菌落表示接种量太少 重复试验
第27页，讲稿共118张，创作于星期一
可用直尺或游标卡尺，读取最接近的整毫米数
测量时应将尺子置于倒置的平板上，置平板在黑色无反射光背景上方几厘米处并用反射光照明。
含血的药敏琼脂 应移去平板盖后用反射光照明平板，于表面上方测量抑菌环。
抑菌环直径测量
第28页，讲稿共118张，创作于星期一
测量抑菌环直径时 抑菌环边缘以见不到细菌明显生长为限，测量的是完全抑制的区域直径（包括纸片直径）
按抑菌环直径判断细菌的敏感性，应依据CLSI的解释标准，报告细菌对测试药物敏感、中介、耐药。
第29页，讲稿共118张，创作于星期一
在清楚抑菌环内有独立的菌落生长提示
接种的菌落不纯，需要重新分离、鉴定和药敏试验
抗菌药物选择出的高频突变耐药株
结果判断
第30页，讲稿共118张，创作于星期一
变形杆菌属的菌株可扩散到某些抗菌药物的抑菌环内，故在明显抑菌环内有薄膜状爬行生长可以忽略。
链球菌应检测其生长抑制圈而非溶血抑制圈。
第31页，讲稿共118张，创作于星期一
对于甲氧苄啶和磺胺，拮抗物使细菌轻微生长故抑菌圈直径应忽略细微生长的菌落。
来自血琼脂菌落可能带有足够的甲氧苄啶或磺胺拮抗物，在SXT抑菌圈内细菌可沿敏感菌株周围产生模糊生长。
第32页，讲稿共118张，创作于星期一
检测苯唑西林和万古霉素对葡萄球菌和肠球菌的抑菌环需要用透射光（平板对着光源），抑菌环的边缘用放大镜才可发现小菌落可以忽略。
在纸片周围的抑菌环内有任何可辨的菌落或生长薄膜（包括针尖样菌落）提示耐药。
第33页，讲稿共118张，创作于星期一
报告方式
敏感
菌株能被使用推荐剂量在感染部位达到的抗菌药物浓度所抑制
常规报告
第34页，讲稿共118张，创作于星期一
中介
被测菌株对该药物的MIC接近于血液、组织中通常可达到的浓度而治疗反应率可能低于敏感株。意味着可通过提高剂量或在药物被生理浓集的部位发挥临床效力。
第35页，讲稿共118张，创作于星期一
被测菌不能被该抗菌药物的常用剂量在组织或血液内达到的浓度所抑制
其MIC落在某些范围内提示该菌可能存在特定的耐药机制（如β-内酰胺酶）而且治疗研究表明其临床疗效不可靠。
耐药
第36页，讲稿共118张，创作于星期一
当药物对菌株的MIC高于或抑菌圈直径低于敏感折点时报告为非敏