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透析袋的使用方法
透析袋在使用前如何处理
透析已成为生物化学实验室最简便最常用的分离纯化技术之一。在生物大分子的制备过程中，除盐、除少量有机溶剂、除去生物小分子杂质和浓缩样品等都要用到透析的技术。 
透析只需要使用专用的半液在另一边，小分子即向两边扩散直到平衡透析是利用半透膜的选择性在溶液里分离大分子和小分子的一种分离技术，常常用于除去蛋白或核酸样品中的盐、变性剂、还原剂之类的小分子杂质，有时也用于置换样品缓冲液。样品在膜的一边，缓冲液在另一边，小分子即向两边扩散直到平衡,而大分子则由于半透膜的阻拦而留在一端，通过不断更换缓冲液，即可将样品中要除掉的小分子稀释到足够低的浓度。该技术自五十年代发展流行起来，主要使用半透膜制成的透析袋作为工具，一直存在透析时间长、样品回收率不高、无法处理微量样品的难题。如今Pierce公司推出三种不同的透析工具有效解决了部分问题. 
这是专为10到100微升的微量样品透析而设计的。把样品加在平底的透析管（类似小量提质粒的离心纯化柱Mini Spin，，管底是半透
膜)中，再插入特制的浮板（浮漂）中，置于缓冲液面10分钟即完成透析。实验表明，。如果在装缓冲液的烧杯底加磁力棒搅拌则更能加速透析速度。这种方法有较高的回收率，能够节约珍贵的样品，并能节约时间，特别适合摸条件的预实验。根据半透膜的孔径和分子量截留值（分离范围）可分为3种规格： MWCO、7K MWCO和10K MWCO。
 
透析袋直径大约2cm，样品为大分子溶液，长度约10cm，请问一般多久需要换水，多少天可以除去小分子？
简单的做法是每过1天换水一次，总共换水4-5次。
专业点的做法是，把水置于下面，下面为蒸馏瓶，上面是冷凝管及透析袋，带一个连通器，上面的水满了就会自动跑到蒸馏瓶里，达到无限循环不断把小分子透析到底部蒸馏瓶中。
另外实验室里比较常见的做法是：利用反滴法分级沉淀，大分子会倾向于凝聚，而小分子一般不会析出，即使析出也会以小颗粒状分散于溶液，一般用反滴法得到的产物在氢核磁共振谱上是看不到小分子的吸收峰的，纯度很高。
为了提高透析效率，还可以使用各种透析装置。使用者也可以自行设计与制作各种简易的透析装置。美国美国光谱医学公司生产的各种型号的透析设备，由于使用对流透析的原理，使透析速度和效率大大提高。 
选用透析袋需要知道目的物质的分子量，每次处理的样品量，同一批次的平行试验，是否需要保持目的物质的活性来选择，目前国内使用的透析袋主要由上海欧韦达仪器科技有限公司提供，该公司能提供专业的技术指导。 
 
普通型透析袋是再生纤维素，英文缩写RC。比如美国viskase的透析袋，
再生纤维素是纤维素的一种，
再生纤维素主要是指人工化学合成的。
煮透析袋时EDTA和NAHCO3的作用是什么?
EDTA，二价金属离子螯合剂，除去钙镁等二价离子，防止他们跟目的样品螯合，影响活性
NaHCO3，中和乙酸，延长透析袋寿命。 
2%(W/V)碳酸氢钠和 1mmol/L EDTA(pH )煮沸后我直接就透析了，忘了再1mmol/L EDTA(pH )煮沸了，透析效果会不会不好？没有EDTA煮问题不大。EDTA煮主要是为了除去生产时附在透析袋上的金属离子的。如果你的蛋白对金属不敏感的话，第一次煮过就差不多了。 
 
市售透析袋大多都是纤维素成分的，在做透析时容易发生破袋现象。
简单的解决方法就是套两层透析袋。这样可以保证在透析所需时间中不会都破袋。即便是含有纤维素酶，这时候它也几乎没有活性。因为样品中还含有其他杂质，再加上不在适宜的反应PH和水解温度下。可能是你透析袋装液时的预留空间不够，应留1/3-1/2空间。
硫酸铵分级沉淀蛋白质的原理和方法是什么
 原理就是溶液中的离子强度不同时，不同蛋白质的溶解度不同，步骤就是不断加硫酸铵…以血浆为例：加到盐浓度20~30%时纤维蛋白原沉淀，再加到浓度50%时球蛋白沉淀，饱和时清蛋白沉淀…
一， 基本原理 
硫酸铵沉淀法可用于从大量粗制剂中浓缩和部分纯化蛋白质。用此方法可以将主要的免疫球从样品中分离，是免疫球蛋白分离的常用方法。高浓度的盐离子在蛋白质溶液中可与蛋白质竞争水分子，从而破坏蛋白质表面的水化膜，降低其溶解度，使之从溶液中沉淀出来。各种蛋白质的溶解度不同，因而可利用不同浓度的盐溶液来沉淀不同的蛋白质。这种方法称之为
盐析。盐浓度通常用饱和度来表示。硫酸铵因其溶解度大，温度系数小和不易使蛋白质变性而应用最广。 原理就是溶液中的离