4 流式细胞术在免疫学的应用 PPT课件.ppt

FCM在免疫学中的应用
一、流式细胞免疫学样品制备的基本原理
流式免疫技术是以单细胞或单细胞核为研究对象,并结合传统的免疫学方法,其基本原理是,细胞上的抗原(或细胞膜受体)与相应的单克隆抗体结合,形成带有荧光的抗原抗体复合物,通过流式细胞术测定其特定荧光量
二、流式免疫学染色方法
免疫样品的制备要求:
,这是流式测定的基础,如果悬液细胞数量过少,测定结果的准确性可能会受到影响
,有可能干扰免疫荧光的分布,应予以排除,以免引起测定结果的假阴性或假阳性
免疫样品的制备要求:
,在通常情况下,流式免疫样品的制备采用直接或间接免疫标记法
二、流式免疫学染色方法
二、流式免疫学染色方法
直接免疫荧光标记法:
取与荧光素交联的抗体直接加入一定量的细胞(约1×l06细胞/ml) 悬液中,进行免疫标记反应。如做双参数标记染色,可把两种分别标有不同荧光素的抗体同时加入
二、流式免疫学染色方法
直接免疫荧光标记法:
二、流式免疫学染色方法
直接免疫荧光标记法:
2 标记反应一定时间后,用PBS液(-)洗涤细胞悬液两次,离心后重新悬浮于缓冲液中,上机检测
二、流式免疫学染色方法
直接免疫荧光标记法:
优点:

所测结果准确,操作简便,阴阳性结果易分析,适用于同一细胞群体多种参量标记的测定
二、流式免疫学染色方法
直接免疫荧光标记法:
缺点:

在检查每一抗原时都要制备与抗原相应的荧光标记抗体,不但荧光抗体制备复杂,而且费用昂贵,另外其敏感性也较间接法稍差
二、流式免疫学染色方法
间接免疫荧光标记法:
取一定量的细胞或细胞核悬液约 1x106 细胞/ml 加入特异的第一抗体,待结合反应一定时间后,洗去多余的抗体,加入荧光标记的第二抗体,形成一种抗原-抗体-抗抗体免疫复合物,通过FCM检测其荧光